細(xì)胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒——CCK8

一、包裝規(guī)格

貨號(hào)：K009-100、 K009-500、K009-1000、K009-3000

規(guī)格： 100T 、 500T 、 1000T 、 3000T

儲(chǔ)存條件: 4℃避光保存，有效期一年。

二、產(chǎn)品說明

Cell Counting Kit 簡稱 CCK 試劑盒，為 MTT 法的替代方法，是一種基于 WST（水溶性四唑鹽，化學(xué)名：2-(2-甲 氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

CCK 法與其它檢測方法之間的比較：

CCK 用途：藥物篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定等

三、操作說明

Ⅰ、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí)）

1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

2、按比例（例如：1/2 比例）依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做 3-5 個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組 3-6 個(gè)復(fù)孔。

3、接種后培養(yǎng) 2-4 小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后加 CCK 試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測定 OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X 軸），OD 值為縱坐標(biāo)（Y 軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲 線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入 CCK 后的培養(yǎng)時(shí)間。）

Ⅱ、細(xì)胞活性檢測

1、在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在 37℃,5% CO2 的條件下）。

2、向每孔加入 10 μL 的 CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù)）。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。

4、用酶標(biāo)儀測定在 450nm 處的吸光度。

5、如果暫時(shí)不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶 液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

Ⅲ、細(xì)胞增值-毒性檢測

1、在 96 孔板中配置 100μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí)（在 37℃，5% CO2 的條件下）。

2、向培養(yǎng)板加入 10μL 不同濃度的待測物質(zhì)。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24 或 48 小時(shí)）。

4、向每孔加入 10μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù)）。

5、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。

6、用酶標(biāo)儀測定在 450nm 處的吸光度。

7、如果暫時(shí)不測定 OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS 溶 液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

注意：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加 CCK 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。

備注：

①建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入 CCK 試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。

②有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入 CCK 試劑時(shí)， 建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基頁面下加，容易產(chǎn)生氣泡，會(huì)干擾 OD 值讀數(shù)。

③白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時(shí)間。

④當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為 1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于 2,500 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果 要使用 24 孔板或 6 孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的 10% 加入 CCK 溶液。

⑤如果沒有 450nm 的濾光片，可以使用吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片，但是 450nm 濾光片的檢測靈敏度最高。

⑥培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測造成影響。

活力計(jì)算： 細(xì)胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0 加藥）-A（空白）] ×100

A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK 溶液和藥物溶液的孔的吸光度 A（空白）：具有培養(yǎng)基和 CCK 溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度

A（0 加藥）：具有細(xì)胞、CCK 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力 保存條件：4℃干燥避光保存，有效期一年。

僅供科學(xué)研究使用，禁止用于它用。

細(xì)胞增殖及毒性檢測CCK試劑盒系列貨號(hào)規(guī)格：

Zeta Life介紹：
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深圳市安培生物科技有限公司是美國 Zeta Life 公司的中國深圳地區(qū)總代理。精心經(jīng)營細(xì)胞培養(yǎng)品試劑，均經(jīng)過反復(fù)充分驗(yàn)證，產(chǎn)品效果好且重復(fù)性佳。尊敬的客戶您如在訂購過程中遇到任何問題都可以與我司在線客服聯(lián)系尋求幫助。