目錄:優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 禽腺病毒 I 群(FADV-I)核酸檢測(cè)試劑盒
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更新時(shí)間:2024-06-26 13:46:54瀏覽次數(shù):781評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
---|---|---|---|
貨號(hào) | YLK10014P | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) | 英文名稱 | I group of Fowl Aviadenovirus Detection Kit |
保存條件 | -20℃±5℃,避光保存 | 有效期 | 12個(gè)月 |
試劑盒說(shuō)明 | 不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用 |
禽腺病毒 I 群(FADV-I)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光 PCR 法)
【產(chǎn)品名稱】
商品名稱:禽腺病毒 I 群(FADV-I)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光 PCR 法)
Name :I group of Fowl Aviadenovirus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】25T/盒、50T/盒
【預(yù)期用途】
I 群禽腺病毒(I group of Fowl Aviadenovirus Detection Kit)是無(wú)囊膜、線性雙股 DNA 病毒,屬于腺病毒科、禽腺病毒屬成員。該病毒可感染雞、火雞及其他禽類。FADV-I 可致雞發(fā)生包涵體肝炎、心包積水綜合征和肌胃糜爛等疾病。該病常與禽類其他病原混合感染,感染雞只可繼發(fā)再生障礙性貧血、肝炎及產(chǎn)蛋量下降等。
本試劑盒適用于檢測(cè)心臟、肝臟、脾臟、腎臟、腺胃、胸腺、胰腺、法氏囊、腦和泄殖腔拭子樣品等樣本中的 I 群禽腺病毒,用于 I 群禽腺病毒感染的輔助診斷。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用 TaqMan 探針?lè)▽?shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計(jì)一對(duì) I 群禽腺病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光 PCR 技術(shù)對(duì) I 群禽腺病毒的 DNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染病料的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
包裝規(guī)格 | 25T/盒 | 50T/盒 |
FADV-I 反應(yīng)液 | 500μL×1 管 | 500μL×2 管 |
酶液 | 25μL×1 管 | 50μL×1 管 |
FADV-I 陽(yáng)性質(zhì)控品 | 50μL ×1 管 | 50μL ×1 管 |
陰性質(zhì)控品 | 250μL ×1 管 | 250μL ×1 管 |
說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用
【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò) 5 次,有效期 12 個(gè)月。
【適用儀器】
ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。
【標(biāo)本采集】
病死禽、撲殺禽心臟、肝臟、脾臟、腎臟、腺胃、胸腺、胰腺、法氏囊、腦等組織;待檢活禽活,取泄殖 腔拭子,放于 1mL 50%甘油生理鹽水中
【保存和運(yùn)輸】
采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò) 24 h;若需長(zhǎng)期保存,應(yīng)放置-70℃以下保存,凍融不超過(guò) 3 次。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
組織樣品:稱取樣品約 1g,手術(shù)/剪剪碎混勻后,于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中;泄殖腔拭子直接取 100μL 提取。
1.2 核酸提取
推薦采用公司生產(chǎn)的核酸提取/或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進(jìn)行核酸提取, 請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿
10 份,多配制 1 份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 | FADV-I 反應(yīng)液 | 酶液 |
用量(樣本數(shù)為 N) | 19μL | 1μL |
將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,20μL/管。
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟 1 提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻, 短暫離心。
4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;
熒光通道選擇:檢測(cè)通道(ReporterDye)FAM,淬滅通道(QuencherDye)NONE,ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX
參比熒光,選擇 None 即可。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時(shí)間 | 收集熒光信號(hào) |
1 | 1 cycle | 95℃ | 2min | 否 |
2 | 45 cycles | 95℃ | 15sec | 否 |
60℃ | 30sec | 是 |
5. 結(jié)果分析判定
5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定(請(qǐng)參照各儀器使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行設(shè)置,以分析 ABI7500 儀器為例)
反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值(用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整,Start 值可設(shè)在 3~15、End 值可設(shè)在 5~20,使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期,陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線),點(diǎn)擊 Analyze 自動(dòng)獲得分析結(jié)果。
5.2 結(jié)果判斷
陽(yáng)性:檢測(cè)通道 Ct 值≤40,且曲線有明顯的指數(shù)增長(zhǎng)曲線; 陰性:樣本檢測(cè)結(jié)果 Ct 值>40 或無(wú) Ct 值。
5.3 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:無(wú)特異性擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示;
陽(yáng)性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。
6. 檢測(cè)方法的局限性
1. 樣本檢測(cè)結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);
2. 樣本提取過(guò)程中沒(méi)有控制好交叉污染,會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果;
3. 陽(yáng)性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果;
4. 病原體在流行過(guò)程中基因突變、重組,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
5. 不同的提取方法存在提取效率差異,會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
6. 試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果;
7. 本檢測(cè)結(jié)果僅供參考,如須確診請(qǐng)結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測(cè)手段。
【注意事項(xiàng)】
1. 所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行;
2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,wan全混勻并短暫離心;
3. 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4. 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
7. 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;
8. 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)