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目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒

牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒
  • 牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
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具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 YLKBIO
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 產品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 上海
屬性

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更新時間:2024-06-27 08:38:44瀏覽次數:4104評價

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純度 詳詢 供貨周期 現貨
規格 50T 貨號 YLK10312P
應用領域 化工,生物產業 主要用途 科研實驗
英文名稱 Bovine?growth?hormone?(BGH)Probe?qPCR?Kit 運輸方式 低溫運輸
保存條件 -20℃保存 有效期 12個月
自備試劑 樣品DNA 關聯產品 牛生長激素基因染料法熒光定量PCR試劑盒
牛生長激素是牛腦垂體分泌的一種肽類激素,用于調節代謝過程、促進動物生長。研究發現將牛生長激素注入母牛體內可以增加其產奶量。牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒就是以探針法熒光定量PCR技術為基礎開發的專門檢測牛生長激素基因的試劑盒

產品簡介

通用名稱:牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒

Name:Bovine growth hormone (BGH)Probe qPCR Kit

包裝規格:50T/盒


產品及特點

牛生長激素是牛腦垂體分泌的一種肽類激素,用于調節代謝過程、促進動物生長。研究發現將牛生長激素注入母牛體內可以增加其產奶量。牛生長激素基因探針法熒光定量PCR試劑盒就是以探針法熒光定量PCR技術為基礎開發的專門檢測牛生長激素基因的試劑盒,它具有下列特點:

1.即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。

2.引物和探針經過優化,靈敏性高。

3.提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。

4.特異性高,引物是根據牛生長激素基因DNA高度保守區設計,不會跟其他微生物的DNA發生交叉反應。

5.既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數量級。

6.本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應。

7.本產品只能用于科研。

運輸及保存

低溫運輸,-20℃保存,保存期限為12個月。

自備試劑

樣品DNA

使用方法

一、稀釋標準曲線樣品(以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1.       標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。

2.      用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同。

3.      在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.      換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.      換槍頭,在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.      重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

7.      如果有N個樣品待提取,最好設置N+2個提取,多出的是PC(樣品制備陽性對照)和NC(樣品制備陰性對照)。可以取陽性對照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規定體積一致,以此作為PC。另外用水作為NC。

8.      用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數DNA/提取試劑盒兼容。

三、Probe qPCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行)

9.如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),6個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復,則標記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(用第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):

成分/每管

樣品管

N+2

PCR陰性對照管

標準曲線

樣品管(1-6管)

A

10 μL

10 μL

10 μL

D

3 μL

3 μL

3 μL

N+2個待測DNA模板

7 μL

-

-

C

-

7 μL

-

6步所得標準曲線樣品稀釋液(1-6號)

-

-

7 μL1號樣到1號管,2號樣到2號管









11.蓋上蓋子后上機,按下面參數進行PCR:

過程

溫度

時間

預變性

95℃

10 min

PCR反應

45個循環)

95℃

15 sec

60

60 sec(采集FAM通道的熒光信號)






四、數據處理

12.如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品核酸濃度的log值,再推算出其濃度。

13.如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct值應該小于或等于39。對待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于39則為陽性。如果在39-40之間,則重復一次。重復實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。

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