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目錄:優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)熒光PCR試劑盒

牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)熒光PCR試劑盒
  • 牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)熒光PCR試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 YLKBIO
  • 型號
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 上海
屬性

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更新時間:2024-06-26 17:48:42瀏覽次數(shù):582評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
貨號 YLK10136P 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 科研實驗 英文名稱 Bovine?Viral?Diarrhea?Virus?Detection?Kit?(Real-Ti
保存條件 -20℃±5℃?,避光保存 有效期 12?個月
牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)熒光PCR試劑盒適用于檢測的牛的腸粘膜、腸系膜淋巴結(jié)組織、排泄物等標(biāo)本中牛病毒性腹瀉病毒核酸,適用于牛病毒性腹瀉病毒感染的輔助診斷。

牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)熒光PCR試劑盒

產(chǎn)品名稱:

通用名稱:牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)熒光PCR試劑盒

Name:Bovine Viral Diarrhea Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method) 50T/盒

包裝規(guī)格:50T/盒

預(yù)期用途:

本試劑盒適用于檢測的牛的腸粘膜、腸系膜淋巴結(jié)組織、排泄物等標(biāo)本中牛病毒性腹瀉病毒核酸,適用于牛病毒性腹瀉病毒感染的輔助診斷。

檢驗原理:

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計一對牛病毒性腹瀉病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光 PCR 技術(shù)對牛病毒性腹瀉病毒的核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學(xué)診斷。

試劑組成:

包裝規(guī)格

50T/盒

BVDV 反應(yīng)液

500μL×2 管

酶液

50μL×1 管

BVDV 陽性質(zhì)控品

50μL ×1 管

陰性質(zhì)控品

250μL ×1 管

說明: 不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

保存條件及有效期:

-20℃±5℃ ,避光保存、運輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個月。

適用儀器:

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標(biāo)本采集:

病死或撲殺牛,取腸粘膜、腸系膜淋巴結(jié)組織; 待檢活牛,取排泄物,放入 1mL50%甘油生理鹽水中。

保存和運輸:

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標(biāo)本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸, 嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

使用方法:

1.樣本處理(樣本處理區(qū))

樣本前處理

A組織樣品: 每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手術(shù)/剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心2min,取上清液 100μL于 1.5mL 滅菌離心管中; 咽拭/子樣品直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

B核酸提取

推薦采用公司生產(chǎn)的核酸提取/或純化試劑(磁珠法或離心柱法) 進行核酸提取,請按照試劑說明書進行操

作。

2.試劑配置(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照; 樣品每滿

10 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

BVDV 反應(yīng)液

酶液

用量(樣本數(shù)為 N)

20μL

1μL

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,21μL/管。

3.加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,

短暫離心。

4.PCR擴增(核酸擴增區(qū))

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為  25μL;

熒光通道選擇:   檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇

ROX 參比熒光,選擇None 即可。

4.3  推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時間

收集熒光信號

1

1 cycle

42℃

20min

2

1 cycle

95℃

10min

3

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec







5.結(jié)果分析判定

5.1結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結(jié)果分析,當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 start 值(一般可在 3~ 15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié)),以及 Threshold 的Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結(jié)果。

5.2結(jié)果判斷

陽性: 檢測通道 Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線;

可疑: 檢測通道 35<Ct 值≤38,建議重復(fù)檢測,如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38 ,且曲線有明顯的增長曲線, 判定為陽性,否則為陰性;

陰性: 樣本檢測結(jié)果Ct 值>38 或無 Ct 值。

6.質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品: Ct>38 或無 Ct 值顯示;

陽性質(zhì)控品: 擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時滿足,否則實驗視為無效。

7.檢測方法的局限性

1. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運送以及保存質(zhì)量有關(guān);

2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;

3.  陽性對照、擴增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;

4. 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

5. 不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;

6. 試劑運輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;

7. 本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項:

1. 所有操作嚴(yán)格按照說明書進行;

2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,wan全混勻并短暫離心;

3. 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

4. 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;

7. 實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8. 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通則》 進行處理


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