目錄:優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 50T霍亂弧菌O1(VC O1)核酸檢測試劑盒熒光PCR法
CAS | / | 純度 | 100 |
---|---|---|---|
分子量 | / | 分子式 | / |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
貨號 | YLK10210P | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 |
霍亂弧菌O1(VC O1)核酸檢測試劑盒熒光PCR法
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:霍亂弧菌O1(VC O1)核酸檢測試劑盒熒光PCR法
Name:Fluorescent PCR method of Vibrio cholerae O1 (VC O1) nucleic acid detection kit
【包裝規(guī)格】50T/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于檢測氣管分泌物拭子、肺組織等樣本中的霍亂弧菌O1,用于霍亂弧菌O1感染
的輔助診斷,其檢測結(jié)果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計一對霍亂弧菌O1特異性引物,結(jié)合一條特異
性探針,用熒光 PCR 技術(shù)對霍亂弧菌O1的 DNA 進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學
診斷。
【試劑組成】
名 稱 | 50T/盒 |
反應(yīng)液 | 500μL×2 管 |
酶液 | 50μL×1 管 |
陽性質(zhì)控品 | 50μL ×1 管 |
陰性質(zhì)控品 | 250μL ×1 管 |
說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
霍亂弧菌(Vibrio cholerae)是革蘭氏陰性菌,菌體短小呈逗點狀,有單鞭毛、菌毛,部分有莢膜。共分為139個血清群,其中O1群和O139群可引起霍亂。
霍亂弧菌是人類霍亂的病原體,霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一。曾在世界上引起多次大流行,主要表現(xiàn)為劇烈的嘔吐,腹瀉,失水,死亡率甚高。屬于國際檢疫傳染病。
弧菌屬(Vibrio)中霍亂弧菌(V.cholerae)、引起一種烈性腸道傳染病,發(fā)病急、傳染性強、病死率高,屬于國際檢疫傳染病。
霍亂弧菌包括兩個生物型:古典生物型(Classical biotype)和埃爾托生物型(EL-Tor bio-type)。這兩種型別除個別生物學性狀稍有不同外,形態(tài)和免疫學性基本相同,在臨床病理及流行病學特征上沒有本質(zhì)的差別。自1817年以來,全球共發(fā)生了七次世界性大流行,前六次病原是古典型霍亂弧菌,第七次病原是埃爾托型所致。PCR技術(shù),即聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)是由美國PE Cetus公司的Kary Mullis在1983年(1993年獲諾貝爾化學獎)建立的。這項技術(shù)可在試管內(nèi)的經(jīng)數(shù)小時反應(yīng)就將特定的DNA片段擴增數(shù)百萬倍,這種迅速獲取大量單一核酸片段的技術(shù)在分子生物學研究中具有舉足輕重的意義,極大地推動了生命科學的研究進展。它不僅是DNA分析常用的技術(shù),而且在DNA重組與表達、基因結(jié)構(gòu)分析和功能檢測中具有重要的應(yīng)用價值。
PCR可以被認為是與發(fā)生在細胞內(nèi)的DNA復制過程相似的技術(shù),其結(jié)果都是以原來的DNA為模板產(chǎn)生新的互補DNA片段。細胞中DNA的復制是一個非常復雜的過程。參與復制的有多種因素。PCR是在試管中進行的DNA復制反應(yīng),基本原理與細胞內(nèi)DNA復制相似,但反應(yīng)體系相對較簡單。
PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)做準備;
②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合;
③引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。
重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈",而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
【注意事項】
1.所有操作嚴格按照說明書進行;
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,*混勻并短暫離心;
3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;
7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。
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