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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50T |
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貨號 | YLK10328P | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研實驗 | 英文名稱 | Diagnostic Kit for MON87705 Gene DNA (Real-Time PC |
保存條件 | -20℃避光保存 | 有效期 | 12 個月 |
注意事項 | 避免反復凍融,反復凍融不能超過 5 次 | 標本采集 | 稱取 200g 樣品 |
轉基因大豆MON87705品系熒光PCR試劑盒
【產品名稱】
通用名稱:轉基因大豆MON87705品系熒光PCR試劑盒
Name:Transgenic soybean MON87705 line fluorescent PCR kit
【包裝規格】50T/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測轉基因植物的 MON87705 基因,用于篩查待檢測植物中是否含有 MON87705 成分。其檢測結果僅供參考。
【檢驗原理】
本試劑盒用國家標準的 MON87705 特異性引物和探針,用熒光 PCR 技術進行轉基因成分的檢測。
【試劑組成】
名 稱 | 50T/盒 |
MON87705反應液 | 500μL×2 管 |
酶液 | 50μL×1 管 |
MON87705陽性質控品 | 50μL ×1 管 |
陰性質控品 | 250μL ×1 管 |
說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次,有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】
稱取 200g 樣品。
【保存和運輸】
上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 0℃冰壺。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區)
1.1 樣本前處理
固體樣本:用粉碎機或冷凍研磨儀將樣品研磨至細粉狀。
1.2 DNA 提取
對于固體標本,DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法:
1) 每個樣品取 2 個平行管。稱取 200mg 粉碎的樣品,加入 1mL 預冷至 4℃的抽提液,劇烈搖動混勻后,在冰上靜止 5min,4℃條件下 10000g 離心 15min,棄上清液;
2) 加入 600μL 預熱至 65℃的裂解液,充分重懸沉淀,在 65℃恒溫保持 40min,期間顛倒混勻 5 次;
3) 室溫條件下10000g 離心10min,取上清液轉移至新離心管中,加入5μLRNAseA, 37℃恒溫 30min,分別用等體積苯/酚:異戊醇溶液和三氯jia烷:異戊醇溶液各抽提一次;
4) 室溫條件下,10000g 離心 10min,取上清液至新離心管,加入三分之二體積的異丙醇,十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液(pH=6.5),-20℃放置 2-3h;
5) 在 4℃條件下,10000g 離心 15min,棄上清液,用 70%乙醇洗滌沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;
6) 加入 50μL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA/提取試劑盒。
油脂樣本請直接選用市售油脂 DNA/提取試劑盒,按說明操作。
2. 試劑配制(試劑準備區)
根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:
試劑 | MON87705反應液 | 酶液 |
用量 | 20μL | 1μL |
3. 加樣(樣本處理區)
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR 擴增(核酸擴增區)
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;
4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25μL;熒光通道選擇: 檢測通道
(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)選擇 NONE,請勿選擇ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環參數設置:
步驟 | 循環數 | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
5.結果分析判定
5.1 結果分析條件設定
設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。
5.2 結果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數增長曲線;
可疑:檢測通道 35<Ct 值≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35<Ct 值≤38,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。
6. 質控標準
陰性質控品:Ct>38 或無 Ct 值顯示;
陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。
7. 檢測方法的局限性
樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;
樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;
陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;
病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;
不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;
試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果;
本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項】
所有操作嚴格按照說明書進行;
試劑盒內各種組分使用前應自然融化,wan全混勻并短暫離心;
反應液應避光保存;
反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;
樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;
實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。