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純度 | 100 | 供貨周期 | 現貨 |
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規格 | 48T | 貨號 | YLK10350P |
應用領域 | 化工,生物產業 | 主要用途 | 科研實驗 |
中文名稱 | 轉基因大豆品系?MON87751?核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 保存條件 | -20℃保存 |
有效期 | 15個月 | A-MON87751-P | 1000?μL?×?1?支 |
PG-MON87751-P | 100?μL?×?1?支 | NG-P | 100?μL?×?2?支 |
轉基因大豆品系MON87751核酸檢測試劑盒
【產品名稱】
通用名稱:轉基因大豆品系MON87751核酸檢測試劑盒
Name:Transgenic soybean MON87751 line fluorescent PCR kit
【包裝規格】48T/盒
【產品說明】
轉基因檢測系列產品可針對食品、飼料等樣品中轉基因成分的特異核酸片段進行擴增,通過實時擴增曲線判定結果。本產品用于轉基因大豆品系 MON87751 成分的檢測,檢出限為 0.01%。
【產品組成】
試劑 | 含量 |
A-MON87751-P | 1000 μL × 1 支 |
NG-P | 100 μL × 2 支 |
PG-MON87751-P | 100 μL × 1 支 |
【適應儀器】
ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等實時熒光 PCR 儀。
【自備耗材和儀器】
①冰盒;②移液器(0.5-10 μL,10-100 μL,100-1000 μL)及配套滅菌吸頭;③滅菌 0.2 mL PCR 管或八聯管;
④離心機;⑤渦旋混勻器;⑥金屬浴;⑦均質機、攪拌機或研缽等研磨器具;⑧電子天平。
【 注意事項】
1. 本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實驗要分區操作。
1) 第一區:試劑準備區。
2) 第二區:樣本制備區。
3) 第三區:擴增及產物分析區。
★ 分區之間最好進行物理性隔離,避免人為因素造成的污染。
2. 實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套,不同區域獨立使用工具,需更換手套和實驗服。
3. 嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰盒上操作。
4. 反應液中的成分對光敏感,應避光保存。試劑使用前要wan全解凍,但應避免反復凍融,推薦使用前離心 30
秒,并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
5. 反應結束后,擴增管請置于密封袋內丟棄,當日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。
6. 不同批號試劑請勿混合使用,在有效期內使用。
【樣品處理】
參照《GB/T 19495.3-2004 轉基因產品檢測 核酸提取純化方法》或其他標準處理樣品,除了處于食物和(或) 飼料鏈起始端的農產品和粗加工材料(如粉碎的產品),大多數工業加工的食品經過了物理、化學及酶的處理。這些處理會降低 DNA 的含量及純度。因此,每一方法的適用性及重復性會隨特異樣品而異,一種特定的 DNA/提取方法的性質特征依賴于被研究的食品種類。實驗室樣品的代表性應符合《GB/T 19495.7-2004 轉基因產品檢測抽樣和制樣方法》。制備的樣本保存待用。
★ 若使用非一次性研磨器研磨樣品,一定要che底清洗研磨器并充分干燥后再進行下一份樣品的研磨,防止交叉污染。
【實驗操作】
1. 試劑配制(試劑準備區,放置于冰盒中進行):
若有 N 個待檢樣品,則參照下表,按照 N+2 個數量計算反應液用量(N 個待檢樣品+1 個空白對照+1 個陽性照),渦旋混勻,離心 30 秒,分裝于 0.2 mL PCR 管中。
試劑 | 使用量 |
A-MON87751-P | 20×(N+2) μL |
反應液總體積 | 20×(N+2) μL |
2. 模板制備(樣本制備區)
建議使用配套植物基因組 DNA/提取試劑盒,具體過程詳見產品說明書。
3. 添加模板(樣本制備區,放置于冰盒上進行)
在步驟 1 中已含有反應液的 PCR 管中加入 5 μL 模板,順序為 NG-P、待測樣品模板、PG-MON87751-P。渦旋混勻,離心 30 秒,立即進行 PCR 擴增反應。
4. 擴增反應(擴增及產物分析區)
使用熒光定量 PCR 儀,熒光基團選擇 FAM,淬滅基團選擇 NONE。按下列條件設置擴增反應:
PCR 循環 | 熒光收集位點 | |||
去污染 | 37℃ | 10 分鐘 | 1 個循環 | — |
預變性 | 95℃ | 5 分鐘 | 1 個循環 | — |
擴增 | 95℃ | 15 秒 |
40 個循環 | — |
60℃ | 1 分鐘 | ※ |
5. 基線和閾值設定
基線調整取 3-15 個循環的熒光信號,閾值線應超過空白對照擴增曲線的最高點。
【結果判定】
測試樣品檢測 Ct 值≥40,曲線為直線或輕微斜線,無“S"型擴增曲線,可判定樣品不含有 MON87751 品系或含量低于檢出限;
測試樣品檢測 Ct 值≤36,曲線呈“S"型擴增曲線,可判定樣品含有 MON87751 品系;
測試樣品檢測 Ct 值在 36~40 之間,應調整模板濃度,重做實時熒光 PCR。再次擴增后的樣品檢測 Ct 值<40, 則可判定樣品含有 MON87751 品系;再次擴增后的樣品檢測 Ct 值≥40,則可判定該樣品不含有 MON87751 品系或含量低于檢出限。
★NG 反應為平滑直線,PG 反應為“S"型擴增曲線,此次檢測結果有效,否則無效。如重復檢測結果仍為無效,請與技術支持人員聯系。