目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 諾如病毒G1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
純度 | 詳詢 | 供貨周期 | 現貨 |
---|---|---|---|
規格 | 50T | 貨號 | YLK10363P |
應用領域 | 化工,生物產業 | 主要用途 | 科研實驗 |
英文名稱: | Norwalk Virus G1(NV-1) Probe qRT-PCR Kit | 運輸: | 快遞形式 |
保存條件: | -20℃保存 | 有效期: | 12個月 |
自備試劑 | 樣品 RNA | 關聯產品 | 諾如病毒G1型可視化 RT-LAMP 檢測試劑盒 |
產品名稱:諾如病毒G1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
Name:Norwalk Virus G1(NV-1) RT-PCR Kit
包裝規格:50T/盒。
諾如病毒(Norwalk Virus)是單股正鏈 RNA 病毒,屬于人類杯狀病毒屬,是一種引起非細菌性急性腸胃炎的病毒,如諾病毒感染性強,以腸道傳播為主, 通過口-糞傳播,以污染的水源、食物、貝類、物品、空氣作為主要傳播載體。諾如病毒可分為 G I-G 五個基因群,其中引起人類感染的主要是 G1 和 G2 群。因此快速靈敏診斷具有重要意義。本產品以探針法熒光定量 RT-PCR 技術為基礎開發的專門檢測諾如病毒 G1 型的試劑盒,它具有下列特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 RNA 模板。
2.引物和探針經過優化,靈敏性高。
3.提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4.特異性高,引物是根據諾如病毒 G1 型高度保守區設計,不會跟其他病毒的RNA 發生交叉反應。
5.本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應。
6.本產品只能用于科研。
規格及成分
成分 | 十孔盒包裝 |
探針法 qRT-PCR 緩沖液 | 500μL(藍蓋) |
探針法 qRT-PCR 酶混合液 | 100μL(紅蓋) |
熒光PCR 專用模板稀釋液 | 1 mL(黃蓋) |
諾如病毒 G1 型探針法 qRT-PCR 引物混合液 | 100 μL(白蓋) |
諾如病毒 G1 型 qRT-PCR 探針 | 50 μL(棕色管) |
諾如病毒 G1 型探針法 qRT-PCR 陽性對照(1×10E8 拷貝/μL) | 50 μL(黃蓋) |
使用手冊 | 1 份 |
諾如病毒G1型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為12個月。
自備試劑樣品:RNA
使用方法
一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原, 本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
3.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6.重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 RNA 的制備
7.如果有 N 個樣品,最好設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽
性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL 陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣, 以此作為PC。另外用水作為 NC。
8.用自選方法純化樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。
9.如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10.在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好
后最后加):
成分 | 樣品管 N+2 個 | RT-PCR 陰性對照管 | 標準曲線樣品管 (2-7 管) |
探針法 qRT-PCR 緩沖液 | 各 10 μL | 10 μL | 各 10 μL |
探針法 qRT-PCR 酶混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
諾如病毒 G1 型 qRT-PCR 探針 | 各 1 μL | 1 μL | 各 1 μL |
諾如病毒 G1 型探針法 qRT-PCR 引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 各 2 μL |
待測樣品 RNA 模板 | 各 5 μL | - | - |
超純水 | - | 5 μL | - |
第 7 步所得標準曲線樣品稀釋液 (2-7 號) | - | - | 各 5 μL(2號樣到 2 號管,3 號樣到3 號管…) |
11.蓋上蓋子后上機,按下面參數進行 qRT-PCR:
過程 | 溫度 | 時間 |
逆轉錄 | 50℃ | 30min |
預變性 | 94℃ | 10min |
qRT-PCR反應 (40個循環) | 94℃ | 15sec |
60℃ | 1min(采集FAM通道的熒光信號) |
12.如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
13.如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 35,則為陽性。