目錄:優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 綿羊痘病毒PCR試劑盒
純度 | 100 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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規(guī)格 | 50T | 貨號 | YLK10046P |
應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) | 主要用途 | 科研 |
英文名稱: | Sheeppox?Virus(SPPV) | 運(yùn)輸: | 低溫 |
保存: | -20℃ | 有效期: | 1年 |
產(chǎn)品名稱:
商品名稱:綿羊痘病毒PCR試劑盒
Name:Sheeppox Virus(SPPV) PCR試劑盒
包裝規(guī)格:50T/盒
預(yù)期用途
綿羊痘是由羊痘病毒屬中綿羊痘病毒(Sheep pox virus, SPV)引起羊的一種急性、熱性、接觸性傳染病,被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為需通報傳染病,我國列為一類動物疾病。該病主要表現(xiàn)為體溫升高,皮膚、黏膜、內(nèi)臟器官表面發(fā)生廣泛性的丘疹、皰疹或結(jié)節(jié),淋巴結(jié)腫大,病畜消瘦,毛的品質(zhì)下降,產(chǎn)乳量大幅度降低,嚴(yán)重時導(dǎo)致死亡。羊痘分布廣泛,世界各國具有本病爆發(fā)和流行的相關(guān)報道,中東、非洲北部及中部、亞洲流行尤為嚴(yán)重。
本試劑盒適用于檢測綿羊皮膚病變組織、淋巴結(jié)、水泡液等樣本中的綿羊痘病毒,用于綿羊痘病毒感染的輔助診斷。
檢驗(yàn)原理:
綿羊痘病毒PCR試劑盒采用 TaqMan 探針法實(shí)時熒光 PCR 技術(shù),設(shè)計一對綿羊痘病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針, 用熒光 PCR 技術(shù)對綿羊痘病毒的 DNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測,用于臨床上對可疑感染病料的病原學(xué)診斷。
試劑組成:
包裝規(guī)格 | 50T/盒 |
SPV 反應(yīng)液 | 500μL×2 管 |
酶液 | 50μL×1 管 |
SPV 陽性質(zhì)控品 | 50μL ×1 管 |
陰性質(zhì)控品 | 250μL ×1 管 |
說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。
儲存條件及有效期:
-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次,有效期 12 個月。
適用儀器:
ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
標(biāo)本采集:
綿羊皮膚病變組織、淋巴結(jié) 5g;水泡液取 1mL。
保存和運(yùn)輸:
采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過 24 h;若需長期保存,應(yīng)放置-70℃以下保存,凍融不超過 3 次。
使用方法:
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
組織樣品:每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g,手/術(shù)/剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL 于1.5mL 滅菌離心管中;咽/拭子樣品直接取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
1.2 核酸提取
推薦采用優(yōu)利科(上海)生命科學(xué)有限公司生產(chǎn)的核酸/提取/或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進(jìn)行核酸提取,請按照試劑說明書進(jìn)行操作。
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿
10 份,多配制 1 份),每測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 | SPV 反應(yīng)液 | 酶液 |
用量 | 19μL | 1μL |
將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中,20μL/管。
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟 1 提取的核酸、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 5μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻, 短暫離心。
4. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL;
熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇
ROX 參比熒光,選擇 None 即可。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟 | 循環(huán)數(shù) | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 2min | 否 |
2 | 45 cycles | 95℃ | 15sec | 否 |
60℃ | 30sec | 是 |
5. 結(jié)果分析判定
5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定(請參照各儀器使用說明書進(jìn)行設(shè)置,以分析 ABI7500 儀器為例)
反應(yīng)結(jié)束后自動保存結(jié)果,根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值(用戶可根據(jù)實(shí)際情況自行調(diào)整,Start 值可設(shè)在 3~15、End 值可設(shè)在 5~20,使閾值線位于擴(kuò)增曲線指數(shù)期,陰性質(zhì)控品的擴(kuò)增曲線平直或低于閾值線),點(diǎn)擊 Analyze 自動獲得分析結(jié)果。
5.2 結(jié)果判斷
陽性:檢測通道 Ct 值≤40,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線; 陰性:樣本檢測結(jié)果 Ct 值>40 或無 Ct 值。
5.3 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
陰性質(zhì)控品:無特異性擴(kuò)增曲線或無 Ct 值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)增長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應(yīng)同時滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。
6.檢測方法的局限性
1. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān);
2. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結(jié)果;
3. 陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏,會導(dǎo)致假陽性結(jié)果;
4. 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
5. 不同的提取方法存在提取效率差異,會導(dǎo)致假陰性結(jié)果;
6. 試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果;
7. 本檢測結(jié)果僅供參考,如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
【注意事項】
1. 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;
2. 試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,wan全混勻并短暫離心;
3. 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4. 反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5. 使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6. 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
7. 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;
8. 試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。
【參考文獻(xiàn)】
[1] 康文玉, 徐自忠, 高洪等. 羊痘病毒[J]. 中國畜牧獸醫(yī), 2004, 31(12):33-36.
[2] 陳軼霞. 羊痘診斷技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2008, 36(34):15008-15009.
[3] 國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. SN/T 2452-2010 綿羊痘和山羊痘檢疫技術(shù)規(guī)范[S].
[4] 李楊, 于少雄, 顏新敏, 等. 綿羊痘病毒 TaqMan-MGB 熒光定量 PCR 快速檢測方法的建立[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報, 2016.
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