人脈絡膜微血管內皮細胞
產品名稱 ：人脈絡膜微血管內皮細胞
產品貨號 ：YLK-XB0629h
組織來源 ：脈絡膜組織
產品規格 ：5×105cells/T25細胞培養瓶
細胞簡介：
脈絡膜微血管內皮細胞分離自眼球脈絡膜組織。脈絡膜在視網膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細胞，對外力沖擊的耐受性較視網膜差，當眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時，堅硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡膜在內外兩種作用夾攻下而發生破裂和出血。脈絡膜呈暗褐色，圍繞視神經乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區。脈絡膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網膜之間，續連于睫狀體后方。脈絡膜的血循環營養視網膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。
主要功能是營養視網膜外層及玻璃體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同時對視覺系統起保護作用，對整個視覺神經有調節作用。續連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細胞，有營養和遮光作用。
細胞特性
1) 組織來源于人的正常眼組織。
2) 細胞鑒定：CD31免疫熒光染色為陽性。
3) 經鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5) 細胞生長方式：呈鵝卵石樣，不規則細胞，貼壁培養。
質量檢測
優利科生物實驗室分離的該細胞經Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml) ，明膠(0. 1%)
培 養 基 ：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁 細胞形態 內皮細胞樣 傳代特性 可傳2-3代 傳代比例 1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白/酶
培養條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化。
3) 經1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內。
4) 待細胞貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和公司技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
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