人胃癌組織成纖維細胞
產品名稱 ：人胃癌組織成纖維細胞
產品貨號 ：YLK-XB0687h
組織來源 ：胃癌組織
產品規格 ：5×105cells/T25細胞培養瓶
細胞簡介：
胃癌組織源成纖維細胞分離自患有胃癌病人的胃癌組織；胃癌(gastric carcinom a)是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國各種惡性腫瘤中發病率居shou位，胃癌可發生于胃的任何部位，其中半數以上發生于胃竇部，胃大彎、胃小彎及前后壁均可受累，絕大多數胃癌屬于腺癌。在胃癌侵襲和轉移的過程中，涉及諸多復雜的過程，如細胞外基質的硬化和降解、新生血管的形成等，而這些過程會直接或間接的引起腫瘤微環境(T um ormirco en vironm ent)的改變。腫瘤微環境即腫瘤細胞生存的外部環境，由不同種類的非腫瘤性的細胞與細胞外基質(E xtracellularm atrix，EC M )構成，包括纖維細胞，免疫細胞，內皮細胞，充質干細胞等，腫瘤細胞通過調控這些間質細胞，創造出有利于自身侵襲轉移的條件，從而使得腫瘤得到進展。越來越多的證據表明，腫瘤微環境的改變在腫瘤進展中扮演著重要的角色。
在腫瘤微環境中，研究最多也是最主要的間質細胞是腫瘤相關成纖維細胞(cancer-asso ciated fibrobla sts,C A Fs)。C A Fs主要由腫瘤周邊的正常成纖維細胞和成纖維細胞樣細胞演化而來。胃癌組織源成纖維細胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。剛分離的胃癌組織源成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁wan全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
質量檢測
優利科生物實驗室分離的該細胞經Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
培 養 基 ： 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態 ： 成纖維細胞樣
傳代特性 ： 可傳5代左右；3代以內狀態最佳
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白/酶
培養條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化。
3) 經1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養瓶內。
4) 待細胞貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和公司技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決
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