人肺癌成纖維細胞
產品名稱 ：人肺癌成纖維細胞
產品貨號 ：YLK-XB0709h
組織來源 ：肺癌組織
產品規(guī)格 ：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介：
肺癌成纖維細胞分離自肺癌組織；肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管粘膜上皮，故亦稱支氣管肺癌。肺癌可向四周乃至全身擴散。肺癌發(fā)病率和死亡率增長最快，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。
近50年來許多國家都報道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的di一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不wan全明確，大量資料表明，長期大量吸煙與肺癌的發(fā)生有非常密切的關系。肺癌，其實不是一種病，而是幾十種病的組合，有多種亞型，多種特性；根據(jù)肺癌細胞在顯微鏡下的形態(tài)特點，可以初步分為兩種類型：小細胞肺癌(SC LC )15% 和非小細胞肺癌(N SC LC )85% 。
這兩種類型肺癌的生長特點、擴散風險和治療方案均不相同。絕大多數(shù)肺癌是非小細胞肺癌，約占85% 。它又能進一步被分為三類，分別是：腺癌，鱗癌和大細胞癌。其中腺癌是最主要的類型，約占非小細胞肺癌中的50% 。如果是不吸煙的女性患者，幾乎全部都是腺癌。人肺癌成纖維細胞是肺癌組織中的癌相關成纖維細胞，癌相關成纖維細胞(cancer associated fibroblast，C A F)在腫瘤微環(huán)境中的重要作用已受到廣泛的重視。該細胞通過與癌細胞的直接接觸、分泌多種因子以及對腫瘤基質的改造，促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉移甚至耐藥性的發(fā)生。隨著研究的深入，有人提出C A F可能成為抗腫瘤/治療的新靶點。然而C A F的分化來源多樣，相應的形態(tài)和功能各異，因此深入了解C A F的分化來源有利于更全面地認識腫瘤發(fā)展的機制，為臨床治療提供理論依據(jù)，體外培養(yǎng)肺癌成纖維細胞對肺癌研究有重要意義。
質量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
包被條件 ： 貼壁不包被
培 養(yǎng) 基 ： 含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態(tài) ： 成纖維細胞樣
傳代特性 ： 可傳5代左右；3代以內狀態(tài)最佳
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白/酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完培至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內加入5ml完培終止消化。
3) 經1000rpm離心5min丟棄上清，用5ml完培基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內。
4) 待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰/酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和公司技術部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決
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