人臍帶血造血干細胞
產(chǎn)品名稱 :人臍帶血造血干細胞
產(chǎn)品貨號 :YLK-XB0721h
組織來源 :臍帶血
產(chǎn)品規(guī)格 :5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介:
臍帶血造血干細胞分離自臍帶血;臍帶血是胎兒娩出、臍帶結(jié)扎并離斷后殘留在胎盤和臍帶中的血液。近十幾年的研究發(fā)現(xiàn),臍帶血中含有可以重建造血和免疫系統(tǒng)的造血干細胞,可用于造血干細胞移植,因此,臍帶血已成為造血干細胞的重要來源。臍帶血中含有大量的干細胞,干細胞是生命的種子,它會分化成機體的各種細胞,結(jié)出各種不同的果實——血液細胞、神經(jīng)細胞、骨骼細胞等。干細胞是具有自我更新、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體;這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數(shù)量,又可進一步分化為各種組織細胞,從而在組織修復等方面發(fā)揮積極作用。
造血干細胞具有自我更新能力并能分化為各種血細胞的前提細胞,最終生成各種血細胞成分,包括紅細胞,白細胞和血小板。造血干細胞需要根據(jù)機體的生理需求適時的補充血液系統(tǒng)各個成熟細胞組分。同時在損傷、炎癥等應激狀態(tài)下,造血干細胞也扮演著調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)血液系統(tǒng)各個細胞組分的生理平衡的角色。臨床治療中,造血干細胞移植廣泛應用于血液系統(tǒng)疾病以及自身免疫疾病,在其它實體瘤的治療中,比如淋巴瘤,生殖細胞瘤,乳腺癌,小細胞肺癌,主要應用于常規(guī)治療失敗或復發(fā)難治以及具有不良預后因素的患者。
造血干細胞以不對稱有絲分裂方式進行增殖,一個干細胞分裂產(chǎn)生兩個子細胞,一個分化為造血祖細胞,另一個則保持干細胞特征。造血干細胞在不斷體外培養(yǎng)產(chǎn)生大量造血祖細胞同時,保持自己既不增殖也不分化。體外培養(yǎng)微環(huán)境合適,造血干細胞可持續(xù)維持培養(yǎng) 60 天左右。 造血干細胞體外增殖培養(yǎng)需要基質(zhì)細胞滋養(yǎng)(滋養(yǎng)層細胞),缺少滋養(yǎng)層細胞不增殖,無法長期培養(yǎng),本產(chǎn)品為收集培養(yǎng)好的造血干懸浮細胞灌裝發(fā)貨,不包含滋養(yǎng)層,因此收貨后建議盡快實驗。
質(zhì)量檢測
優(yōu)利科生物實驗室分離的該細胞經(jīng)Vim entin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 : 含F(xiàn)BS、SC F、IL-3、TPO 、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 : 每2-3天換液一次
生長特性 : 懸浮
細胞形態(tài) : 圓形
傳代特性 : 不建議傳代
消 化 液 : 0. 25% 胰蛋白/酶
培養(yǎng)條件 : 氣相:空氣,95% ;C O2,5%
客戶收到細胞后,請按照以下方法進行操作
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余胰蛋白/酶消化液,37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后,再加入5ml完培終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的完培至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培。
3. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液,1000rpm,離心5min,保留沉淀。
2) 添加0.25%胰蛋白/酶消化液0.5mL至離心管中,重懸沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)。消化完向離心管內(nèi)加入5ml完培終止消化。
3) 經(jīng)1000rpm離心5min丟棄上清,用5ml完培基重懸沉淀,接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。
4) 待細胞貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完培(37℃預熱)。
5) 原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性,貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚賴氨酸PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%),依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中,胰/酶消化時間不宜過長,否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和公司技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,詳盡告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決