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目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 猴痘病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

猴痘病毒染料法熒光定量PCR試劑盒
  • 猴痘病毒染料法熒光定量PCR試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 YLKBIO
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2024-07-17 21:45:19瀏覽次數:316評價

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供貨周期 現貨 規格 50T
貨號 YLK10366P 應用領域 化工,生物產業
主要用途 科研實驗 英文名稱 Monkey Pox Virus(MPV) SYBR qPCR Kit
保存條件 低溫運輸,-20℃保存 有效期 12個月
試劑盒說明 不同批號的試劑盒組分不可交互使用
猴痘病毒染料法熒光定量PCR試劑盒猴痘病毒(Monkey Pox Virus,MPV)會引起猴痘,是一種罕見的病毒性疾病,主要發生于中部與西部非洲熱帶雨林國家。

猴痘病毒染料法熒光定量PCR試劑盒


商品名稱:猴痘病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

Name     :Monkey Pox Virus(MPV) SYBR qPCR Kit

猴痘病毒(Monkey Pox Virus,MPV)會引起猴痘,是一種罕見的病毒性疾病,主要發生于中部與西部非洲熱帶雨林國家。該病于1958年首ci在丹麥哥本哈根一實驗室綠猴中發現,可引起實驗用靈長類動物發病,許多非洲嚙齒動物也都有猴痘病毒感染。該病毒也可感染小鼠、大鼠和兔。1970年剛果首ci報告猴痘病毒感染人類的病例。該病毒對人和動物健康造成較大損害,因此猴痘病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用,為此本公司開發了簡單快捷的猴痘病毒染料法熒光定量PCR檢測試劑盒,它具有下列特點:

1.       即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。

2.      根據猴痘病毒保守序列設計的專一性引物,與相關病毒無交叉反應。

3.      靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。

4.      一管式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。

5.      本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。

6.      本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。

【試劑組成】

包裝規格

50T/盒

2×qPCR MagicMix

500μL(棕色管)

熒光PCR專用模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

猴痘病毒PCR引物混合物

100μL(白蓋)

猴痘病毒PCR陽性對照(1×10E8 拷貝/μL)

50μL(紅蓋)
DNA病毒裂解液(試用裝)15次(9 mL
使用手冊1份
【儲存條件及有效期】

低溫運輸、-20℃保存,有效期一年


【自備試劑】

DNA模板、10×ROX(根據機型決定,具體見使用方法)。


【使用方法】

一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL610倍稀釋度為例)

注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA

1.       片段作為陽性對照。

2.      標記6個離心管,分別為765432

3.      用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。

4.      7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5.      換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6.      換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7.      重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8.       如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為10E4 拷貝/μL10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為10E5 拷貝/μL10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PCNC的體積也必須是200μL

9.      用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA/提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)

10.      如果只做1次重復,則標記N+9PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數量相應增加23倍。

11.      在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):

成分

樣品管

N+2

PCR陰性對照管

PCR陽性

對照管(2-7管)

2×qPCR MagicMix

(棕色管)

10 μL

10 μL

10 μL

猴痘病毒PCR

引物混合液(白蓋)

2 μL

2 μL

2 μL

自備10×ROX (見注)

2 μL

2 μL

2 μL

N+2待測樣品DNA模板

6 μL

不加

不加

7步所得PCR陽性對照

稀釋液(2-7號)

不加

不加

6μL2號樣到2號管,3號樣到3號管

:ABI750077007900儀器需要使用ROX作為對照,其他熒光PCR儀器(如iCycler IQMJ OptionMJ Chromo4MX3000MX4000RotorGene 3000RotorGene 6000LightCycler480)不需要使用ROX,則用水替代。

12.       蓋上蓋子后上機,按下面參數進行PCR(具體PCR參數可以根據儀器不同而自行優化)。

過程

溫度

時間

預變性

95℃

5分鐘

PCR反應

30個循環)

95℃

60

56

60

76

60



13.       數據采集

具體操作按所用儀器推薦的流程進行。本產品中所含的熒光染料在不結合DNA時,最大吸收光譜在471 nm,結合DNA時的最大吸收光譜在500 nm,最大發射光譜在530 nm。信號采集可以設置在復性或延伸步驟。

四、數據處理

14.       如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。

      15.       如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct值應該小于或等于30。對待測樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間,則重復一次。重復實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。

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