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更新時(shí)間:2024-07-18 07:09:59瀏覽次數(shù):319評(píng)價(jià)
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
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貨號(hào) | YLK10378P | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研實(shí)驗(yàn) | 英文名稱 | Rickettsia spp. Probe qPCR Kit |
保存條件 | 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 | 有效期 | 12個(gè)月 |
試劑盒說(shuō)明 | 不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用 |
立克次氏體通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
商品名稱:立克次氏體通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒
Name :Rickettsia spp. Probe qPCR Kit
立克次氏體(Rickettsia)為革蘭氏陰性菌,是一類專性寄生于真核細(xì)胞內(nèi)的 G原核生物。是介于細(xì)菌與病毒之間,而接近于細(xì)菌的一類原核生物。一般呈球狀或桿狀,是專性細(xì)胞內(nèi)寄生物,主要寄生于節(jié)肢動(dòng)物,有的會(huì)通過(guò)蚤、虱、蜱、螨傳入人體、如斑疹傷寒、戰(zhàn)壕熱。本產(chǎn)品就是以探針?lè)晒舛?PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專門(mén)檢測(cè)立克次氏體的試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)立克次氏體通用高度保守區(qū)設(shè)計(jì)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
【試劑組成】
成 份 | 五孔盒包裝 |
2×Probe qPCR MagicMix | 500μL(本色蓋) |
熒光 PCR 專用模板稀釋液 | 1mL(黃蓋) |
立克次氏體探針?lè)?/p> qPCR引物-探針混合液 | 150μL(棕色管) |
立克次氏體qPCR 陽(yáng)性對(duì)照(1×10E7 拷貝/μL) | 50μL(黃蓋) |
使用手冊(cè) | 1 份 |
【儲(chǔ)存條件及有效期】
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。
【自備試劑】樣品 DNA。
【使用方法】
一、稀釋PCR 陽(yáng)性對(duì)照(以10E1-10E6 拷貝/μL 這6個(gè)10倍稀釋度為例)
如果做定性實(shí)驗(yàn),則此步可以跳過(guò)。如果做定量實(shí)驗(yàn),則需要稀釋陽(yáng)性對(duì)照做標(biāo)準(zhǔn)曲線。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。本產(chǎn)品只提供 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 6 號(hào)管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘, 得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 5 號(hào)管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 4 號(hào)管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E4 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 如果有 N 個(gè)樣品,必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是樣品制備 PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是樣品制備 NC(樣品制備陰性對(duì)照)。可以用 10μL 陽(yáng)性對(duì)照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為樣品制備 PC。另外用水作為樣品制備 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DNA/提取試劑盒兼容。
二、Probe qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記 N+9個(gè)PCR 管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照(用水做模板),1個(gè)用于 PCR 陽(yáng)性對(duì)照(用第4號(hào)管中的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為描述操作步驟,
在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè) 置陽(yáng)性對(duì)照,并且陽(yáng)性對(duì)照樣
10. 品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加):
成分 | 樣品管 N+2 個(gè) | PCR 陰性對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)曲線 樣品管(1-6 管) |
2×Probe qPCR MagicMix | 10μL | 10μL | 各 10μL |
立克次氏體探針?lè)╭PCR 引物混合液-探針混合液 | 3μL | 3μL | 各 3μL |
N+2 個(gè)待測(cè) DNA模板 | 7μL | 不加 | 不加 |
超純水 | 不加 | 7μL | 不加 |
第 6 步所得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品稀釋液(1-6 號(hào)) |
不加 |
不加 | 各7μL(1 號(hào)樣到1 號(hào)管,2 號(hào)樣到2 號(hào)管…) |
11. 蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR:
過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
預(yù)變性 | 95℃ | 5min |
qPCR 反應(yīng) (40 個(gè)循環(huán)) | 95℃ | 15sec |
60℃ | 1min(采集 FAM 通道的熒光信號(hào)) |
四、數(shù)據(jù)處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽(yáng)性或陰性,則陰性對(duì)照 Ct 必須大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線,Ct 值應(yīng)該小于或等于 35。對(duì)待測(cè)樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽(yáng)性。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)