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目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 剛地弓形蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

剛地弓形蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
  • 剛地弓形蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 YLKBIO
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2024-07-18 07:21:44瀏覽次數:314評價

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供貨周期 現貨 規格 50T
貨號 YLK10384P 應用領域 化工,生物產業
主要用途 科研實驗 保存條件 低溫運輸,-20℃保存
有效期 12個月 試劑盒說明 不同批號的試劑盒組分不可交互使用
剛地弓形蟲探針法熒光定量PCR試劑盒剛地弓形蟲(Toxophasma gondii)簡稱弓形蟲,弓漿蟲。寄生于人和許多種動物的有核細胞,引起人畜共患的弓形蟲病。特別是在宿主免疫功能低下時致病,屬機會致病原蟲。

剛地弓形蟲探針法熒光定量PCR試劑盒


產品名稱:剛地弓形蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱:Toxophasma gondiI Probe qPCR Kit


剛地弓形蟲(Toxophasma gondii)簡稱弓形蟲,弓漿蟲。寄生于人和許多種動物的有核細胞,引起人畜共患的弓形蟲病。特別是在宿主免疫功能低下時致病,屬機會致病原蟲。因此快速靈敏檢測剛地弓形蟲有重要意義。本產品就是為此目的根據 PCR 原理開發的試劑盒,它具有下列特點:

1.     即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2.    引物和探針經過優化,靈敏性高。

3.    提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。

4.    特異性高,引物是根據剛地弓形蟲高度保守區設計,不會跟其他微生物 DNA 發生交叉反應。

5.    本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應。

6.    本產品只能用于科研。


【試劑組成】

成分

包裝

2×Probe qPCR MagicMix

500 μL(本色蓋)

熒光 PCR 專用模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

剛地弓形蟲探針法 qPCR 引物

混合液

100 μL(白蓋)

剛地弓形蟲 qPCR 探針

100 μL(棕色管)

剛地弓形蟲探針法 qPCR 陽性

對照 (1×10E8 拷貝/μL)

50   μL(黃蓋)

核酸釋放劑(試用裝)20 次(1mL,綠蓋)





【儲存條件及有效期】

低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。


【自備試劑】DNA 模板


【使用方法】

一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原, 本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

1.     標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2.    用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭, 下同)。

3.    在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩 1分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.    換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用

5.    換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.    重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7.    如果有 N 個樣品,最好設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)。可以用 10μL 陽性對照的 10000 倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為 PC。另外用水作為 NC。

8.    用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數 DNA/提取試劑盒兼容。本試劑盒免費贈送 20 次免 DNA 提取的核酸釋放劑,本產品的裂解液可以直接作為 PCR 模板,省略了 DNA 提取步驟。其使用手冊可向本公司客服索取。

三、Probe qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9.    如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.   在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設   置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):

成分

樣品管

N+2 個

PCR 陰性

對照管

標準曲線樣品管(2-7 管)

2×Probe qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

各   10 μL

剛地弓形蟲 qPCR 探針

1   μL

1   μL

各   2 μL

剛地弓形蟲探針法 qPCR 引物混合液

2 μL

2 μL

各 2 μL

N+2 個待測 DNA 模板

6   μL

-

-

超純水

-

6   μL

-

第 7 步所得標準曲線樣品稀釋液(2-7 號)


-


-

各 6μL(2 號樣到 2 號管,3 號

樣到 3 號管…)






11.  蓋上蓋子后上機,按下面參數進行 PCR:

過程

溫度

時間

預變性

95℃

5 min

PCR   反應

(40 個循環)

95℃

15sec

60℃

60sec(采集   FAM 通道的熒光

信號)


四、數據處理

12.   如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

13.   如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽性。


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