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目錄:優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 狗源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒

狗源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒
  • 狗源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 YLKBIO
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2024-07-18 07:23:22瀏覽次數(shù):344評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
貨號 YLK10385P 應用領域 化工,生物產業(yè)
主要用途 科研實驗 保存條件 低溫運輸,-20℃保存
有效期 12個月 試劑盒說明 不同批號的試劑盒組分不可交互使用
狗源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有狗的成分。本試劑盒只能用于科研,足夠 50 次 20μL 體系的熒光定量 PCR。

狗源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒


產品名稱:狗源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒


本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有狗的成分。現(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質地等特性,因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術已經無法對食材的真?zhèn)芜M行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏性,因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。本產品就是為滿足這一需求根據(jù) PCR 原理開發(fā)的產品,它具有下列特點:

1.   即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA。

2.   根據(jù)國家標準 GB/T21105-2007 設計引物,能專一性地檢測出樣品中的狗源成分,但不能檢測其他非狗源的成分。

3.   熒光定量 PCR 檢測,比常規(guī) PCR 更加靈敏。

4.   快速,整個檢測過程(按一個樣品計)所需時間僅為 2.0 小時。

5.   一管式閉管操作,降低了交叉污染。

6.   提供陽性標準品,便于分析實驗結果。

7.   對混合樣品中狗源成分的檢測下限為 0.01%,對樣品中狗源成分的核酸檢測下限為 0.1ng/μL。

8.   本試劑盒只能用于科研,足夠 50 次 20μL 體系的熒光定量 PCR。


【試劑組成】

成分

十孔盒包裝(去紙托)

2×qPCR MagicMix

0.5 mL(棕色

熒光PCR 專用模板稀釋液

1 mL(黃蓋)

狗源性成分 PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

狗源性成分 PCR 陽性對照

50 μL(黃蓋)

DNA 釋放劑試用裝

50 次(成分見下)

DNA 提取試劑溶液 A 成分一

50 μL(白蓋)

DNA 提取試劑溶液 A 成分二

100 μL(綠蓋)

DNA 提取試劑溶液 B

400 μL(紅蓋)

使用手冊

1 份




【儲存條件及有效期】

低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時,由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。最好在專門的區(qū)域操作。


【自備試劑】DNA 模板


【使用方法】

一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

1.  標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2.  用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。

3.  在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.  換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.  換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.  重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7.  用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產品兼容。

8.  如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。如果用本試劑盒自帶的DNA釋放劑試用裝。則按下面步驟操作:

9.  配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液(足夠 10 個樣品)為例:在一干凈塑料管中加入 10μL 溶液 A 成分一,20μL 溶液 A 成分二和 970μL 超純水,充分混合均勻即可。溶液 A 工作液可室溫放置,但最好在一周內用完,不要長期放置。一次檢測一個樣品需要 100μL 溶液 A 工作液,1mL 工作液足夠 10 個樣品。如果待測樣品數(shù)量為其他數(shù)字,配制的溶液 A 工作液的體積需要做相應的調整。

10.  在標記好的 N+2 個離心管中,加入 1-5mg 固體樣品(半粒芝麻大小)或 5μL 液體樣品待測樣品。在樣品制備陽性對照中加入 5μL 陽性對照,在樣品制備陰性對照中加入 5μL 水。

11.  在每個管中加入 100 μL 溶液 A 工作液,確保固體樣品被溶液淹埋,如果是液體樣品則震蕩混勻。

12.  95℃保溫 10 分鐘。

13.  待冷卻到常溫后加入 10μL 溶液 B 并混勻得 DNA 釋放液。每個樣品得到的 DNA

釋放液足夠進行 50-100 次 PCR。

三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

14.  如果只做 1 次重復,則標記 N+9 個PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于PCR 陰性對照,6 個用于標準曲線樣品(也充當 PCR 陽性對照)。如果做 2-3 次重復,則反應設置數(shù)量相應增加 2 或 3 倍。

15.  在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):

成分

樣品管

N+2 個

PCR 陰性

對照管

標準曲線

樣品管(2-7 管)

2×qPCR MagicMix

(棕色管)

各10μL

10μL

各10μL

狗源性成分PCR引物混合液(白蓋)

各2μL

2μL

各2μL

自備 10×ROX (見注)

各2μL

2μL

各2μL

待測樣品DNA模板

各6μL

不加

不加

第 7 步所得標準曲線樣品稀釋液(2-7   號)

不加

不加

各6μL(2號樣到2   號管,3號樣到3號管…)

注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用ROX 作為對照,其他熒光 PCR 儀器(如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX,則用水替代。

16.  蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行 qPCR(具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù) qPCR 儀器的不同而自行優(yōu)化)。

四、qPCR 反應參數(shù)

過程

溫度

時間

預變性

94℃

3 min

 

PCR 反應

(35 個循環(huán))

94℃

45 sec

56℃

45 sec(采集 SYBR 通道的熒光信號

72℃

45 sec

最后延伸

72℃

5 min

五、數(shù)據(jù)處理

16. 以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的log值,再推算出其濃度。

六、電泳檢測

17. 如果有必要電泳確認,可取 5-10μL PCR 產物直接在瓊脂糖凝膠上電泳產物的大小為 213bp。開蓋電泳驗證容易污染實驗環(huán)境,強烈不建議采用此方法。

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