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目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 人免疫缺陷病毒I型通用探針法RT-PCR試劑盒

人免疫缺陷病毒I型通用探針法RT-PCR試劑盒
  • 人免疫缺陷病毒I型通用探針法RT-PCR試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
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具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 YLKBIO
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2024-07-18 10:29:04瀏覽次數:316評價

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供貨周期 現貨 規格 50T
貨號 YLK10398P 應用領域 化工,生物產業
主要用途 科研實驗 保存條件 低溫運輸,-20℃保存
有效期 12個月 試劑盒說明 不同批號的試劑盒組分不可交互使用
人免疫缺陷病毒I型通用探針法RT-PCR試劑盒人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus;abbr:HIV),即艾滋病(AIDS,獲得性免疫缺陷綜合征)病毒,是造成人類免疫系統缺陷的一種病毒。

人免疫缺陷病毒I型通用探針法RT-PCR試劑盒


產品名稱:人免疫缺陷病毒I型通用探針法RT-PCR試劑盒

英文名稱:Human Immunodeficiency Virus 1(HIV-1) RT-PCR Kit

人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus;abbr:HIV),即艾滋病(AIDS,獲得性免疫缺陷綜合征)病毒,是造成人類免疫系統缺陷的一種病毒。1981年,人類免疫缺陷病毒在美國首ci發現。它是一種感染人類免疫系統細胞的慢病毒,屬逆轉錄病毒的一種。目前全球流行的主要是 HIV-1。本產 品就是以探針法熒光定量 RT-PCR 技術為基礎開發的專門檢測人免疫缺陷病毒 I 型通用的試劑盒,它具有下列特點:

1.       即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。

2.      引物和探針經過優化,分析靈敏性高。

3.      提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。

4.      特異性高,引物是根據人免疫缺陷病毒I型RNA高度保守區設計,可以檢測人免疫缺陷病毒I型,不會跟其他病毒的RNA發生交叉反應。

5.      既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數量級。

6.      本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量RT-PCR反應。

7.      本產品只能用于科研。


【試劑組成】

成分

包裝

探針法qRT-PCR緩沖液

500μL(藍蓋)

探針法qRT-PCR酶混合液

100μL(紅蓋)

熒光PCR專用模板稀釋液

1mL(綠蓋)

人免疫缺陷病毒IqRT-PCR

引物-探針混合液

150μL(棕色管)

人免疫缺陷病毒IRT-PCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL)

50μL(黃蓋)

使用手冊

1

【運輸及保存】低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。

【自備試劑】超純水,樣品RNA。

【注意事項】

一、稀釋標準曲線樣品(以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1.      標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。

2.      用帶芯槍頭分別加入45μL熒光RT-PCR專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。

3.      在6號管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.      換槍頭,在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.      換槍頭,在4號管中加入5μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.      重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品RNA的制備

7.       如果有N個樣品,最好設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。

8.      用自選方法純化樣品的RNA,本試劑盒跟市場上大多數RNA/提取試劑盒兼容。

三、Probe qRT-PCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行)

9.      如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個RT-PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于RT-PCR陰性對照(用水做模板),6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復,則標記N+4個RT-PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于RT-PCR陰性對照(用水做模板),1個用于RT-PCR陽性對照(直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.       在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加):


成分

樣品管

N+2

RT-PCR陰性對照

標準曲線樣品管

1-6管)

探針法qRT-PCR緩沖液

10μL

10μL

10μL

探針法qRT-PCR酶混合液

2μL

2μL

2μL

人免疫缺陷病毒IRT-PCR

引物-探針混合液

3μL

3μL

3μL

 N+2個待測RNA樣本

5μL

不加

不加

超純水

不加

5μL

不加

6步所得標準曲線樣品稀釋液(1-6號)

不加

不加

5μL1號樣到1號管,2號樣到2號管














11.      蓋上蓋子后上機,按下面參數進行RT-PCR:

過程

溫度

時間

逆轉錄

50℃

30min

預變性

94℃

5min

RT-PCR反應

45個循環)

94℃

15sec

60

1min(采集FAM通道的熒光信號)

五、數據處理

12.       如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品RNA濃度的log值,再推算出其濃度。

13.      如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須大于或等于45。陽性對照必須有熒

光對數增長,有典型擴增曲線,Ct值應該小于或等于40。對待測樣品,如果其Ct大于或等于45則為陰性,如果小于或等于40則為陽性。如果在40-45之間,則重復一次。重復實驗的Ct值如果大于或等于45則為陰性,如果小于40,則為陽性。

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