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目錄:優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 手足口EV71/CA16/EV三通道核酸檢測試劑盒

手足口EV71/CA16/EV三通道核酸檢測試劑盒
  • 手足口EV71/CA16/EV三通道核酸檢測試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 YLKBIO
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2024-07-18 12:35:35瀏覽次數(shù):594評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
貨號 YLK10403P 應用領域 化工,生物產業(yè)
主要用途 科研實驗 保存條件 低溫運輸,-20℃保存
有效期 9個月 試劑盒說明 不同批號的試劑盒組分不可交互使用
手足口EV71/CA16/EV三通道核酸檢測試劑盒手足口病 ( hand, foot and mouth disease,HFMD)在近年兒童中常見流行 ,由腸道病毒感染引起 ,主要表現(xiàn)口腔黏膜潰瘍性皰疹及四肢末端水皰樣皮疹 ,主要病原為柯薩奇病毒 A16 型(CA16)和腸道病毒 71 型(EV71),二者所致的手足口病臨床難以區(qū)別。

手足口EV71/CA16/EV三通道核酸檢測試劑盒


產品名稱:手足口EV71/CA16/EV三通道核酸檢測試劑盒

英文名稱:Detection Kit for Enterovirus 71/Coxsackievirus A16/Enterovirus RNA (PCR-Fluorescence Probing)

手足口病 ( hand, foot and mouth disease,HFMD)在近年兒童中常見流行 ,由腸道病毒感染引起 ,主要表現(xiàn)口腔黏膜潰瘍性皰疹及四肢末端水皰樣皮疹 ,主要病原為柯薩奇病毒 A16 型(CA16)和腸道病毒 71 型(EV71),二者所致的手足口病臨床難以區(qū)別。其中,EV71 不僅引起手足口病 ,而且可引起嚴重中樞神經系統(tǒng)并發(fā)癥 ,如腦膜炎、腦炎、急性遲緩性癱瘓等。實現(xiàn)對腸道病毒的快速檢測有利于疫情監(jiān)測以及制定有效的預防控制措施。本試劑盒適用于糞便、咽/拭子、肛拭子樣本中腸道病毒的檢測,并可區(qū)分是否為腸道病毒 71 型或柯薩奇病毒A16 型。檢測結果僅供研究,不用于臨床診斷。

【試劑組成】

組分名稱

規(guī)格

數(shù)量

主要成分

PCR 檢測試劑

(50 反應/盒)

EV71/CA16/EV   PCR 反應液A

816µl/管

1

特異性引物、探針、三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液等

EV71/CA16/EV PCR 反應液B

144µl/管

1

熱啟動Taq 酶、c-MMLV 酶等

質控品

陰性質控品

400µl/管

1

生理鹽水

EV71/CA16/EV 陽性質控品

400µl/管

1

含目的片段的重組質粒

【運輸及保存】

試劑盒保存于-20±5℃,有效期 9 個月。

試劑盒在 37℃可保存72 h;試劑在 4℃可保存7 天;避免反復凍融,反復凍融次數(shù)不超過 7 次;試劑開瓶次數(shù)不超過 7 次。運輸采用干冰保持低溫,運輸時間不應超過 3 天。試劑盒生產日期見產品標簽。

【適用儀器】ABI 7500、LightCycler480 等多通道熒光定量PCR 儀。


【注意事項】

1.樣本處理和核酸提取(樣本處理區(qū))

建議取 200μl 液態(tài)樣本進行核酸提取。可采用本公司生產的核酸提取/試劑盒,請按照試劑盒說明書進行操作;也可選擇其他合適的商業(yè)化產品。

本試劑盒中的陰性質控品參與提取,用于對環(huán)境進行監(jiān)控;EV71/CA16/EV 陽性質控品不參與提取,用于PCR 檢測試劑的質控。2.PCR 試劑準備(試劑準備區(qū))

從試劑盒中取出EV71/CA16/EV PCR 反應液A、EV71/CA16/EV PCR 反應液B,室溫融化后振蕩混勻,8,000rpm 離心數(shù)秒后使用。

2.1 EV71/CA16/EV 反應體系配制

取適量PCR 反應管,每管加入EV71/CA16/EV PCR 反應液A 17µl、EV71/CA16/EV PCR 反應液B 3µl(也可根據(jù)PCR 反應用量,計算各組分所需總量,混勻后分裝 20µl 于單個PCR 反應管中);

3. 加樣(樣本制備區(qū))

于上述PCR 反應管中分別加入處理后的陰性質控品、待測標本核酸、EV71/CA16/EV 陽性質控品各5µl,蓋緊管蓋,8,000rpm 離心數(shù)秒后轉移至擴增檢測區(qū)。

3.1  ABI Prism 7500 儀器設置(ABI 7500 儀器操作為例,ABI 7300 儀器參照此操作及儀器操作手冊)

3.1.1 打開“Setup"窗口,按樣本對應順序設置陰性質控(NTC)、陽性質控以及未知樣本(Unknown),并在“Sample Name"一欄中設置樣本名稱;探針檢測模式設置為:Reporter Dye1:FAM,Quencher Dye1:none;Reporter Dye2:VIC ,Quencher Dye2:none; Reporter

Dye3:Texas Red,Quencher Dye3:none;Passive Reference:NONE.

3.1.1  打開instrument 窗口,設置循環(huán)條件如下: 50℃ 15 分鐘,1 個循環(huán);

95℃ 15 分鐘,1 個循環(huán);

94℃ 15 秒→55℃ 45 秒(收集熒光),40 個循環(huán)。設置完成后,保存文件,運行程序。

3.2  LightCycler480 儀器設置

3.2.1  點擊軟件主界面的“New Experiment",進入程序設定界面。

3.2.2  檢測模式設置:從Detection Format 的下拉框中選擇分析模式:Multi Color Hydrolysis Probe,“Customizes"模塊中選擇483-533、 523-568、 558-610 濾片組合,“Block Type"為儀器自動檢測, “Plate ID"可手工輸入或掃描儀掃描,“Reaction Volume"設定為 25ul。

3.2.3  循環(huán)參數(shù):定義PCR 程序中每個步驟(Program Name)及循環(huán)數(shù)(Cycles)和分析模式(Analysis Mode),利用“+"和“-"增加或刪除步驟,擴增參數(shù)如下:

50℃ 15 分鐘,1 個循環(huán);

95℃ 15 分鐘,1 個循環(huán);

94℃ 15 秒 55℃ 45 秒,40 個循環(huán);(此步采集熒光信號:“Analysis Mode"選擇“Quantification",“Acquisition Mode"選擇 “Single")

40℃ 10 秒,1 個循環(huán);

3.2.4  填樣品表:點擊“Sample Editor"模塊,進入樣本信息編輯界面,在“Select Workflow"中選擇“Abs Quant",在“Sample Name" 列中定義樣本名稱,在“Sample Type"欄中選定樣品類型:陰性質控品選NTC;未知樣品選Unknown。

3.2.5  運行程序:點擊“Experiment"模塊,回到程序設定界面,點擊窗口右下方的“Start Run",彈出結果保存窗口,輸入文件名和路徑后進入程序運行界面。

4.  結果分析

4.1  反應結束后保存檢測數(shù)據(jù)文件。

4.2  分析條件設置:根據(jù)分析后圖像調節(jié)Baseline 的start 值、stop 值以及Threshold 的Value 值(用戶可根據(jù)實際情況自行調整, Start 值可以在 3~15、End 值可設在 5~20,調整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線),點擊 Analysis 自動獲得分析結果,在 Report界面察看結果。

【質量控制】

陰性質控品:FAM、VIC、Texas Red 檢測通路無明顯擴增曲線;

陽性質控品:FAM、VIC、Texas Red 檢測通路均有明顯擴增曲線,且 Ct 值≤32; 以上要求需在同一次實驗中同時滿足,否則,本次實驗無效,需重新進行。

【結果判斷】

1.  若檢測樣品的擴增曲線在FAM、VIC、Texas Red 檢測通路均無擴增曲線或Ct 值>38,可判樣品為EV71、CA16、腸道病毒陰性;

2.  若檢測樣品的擴增曲線在FAM 檢測通道有擴增曲線且Ct 值≤38,可判樣品為EV71 陽性;

3.  若檢測樣品的擴增曲線在VIC 檢測通道有擴增曲線且Ct 值≤38,可判樣品為CA16 陽性;

4.  若檢測樣品的擴增曲線在Texas Red 檢測通道有擴增曲線且Ct 值≤38,可判樣品為腸道病毒陽性,此時FAM 或VIC 通道可能為陽性,說明樣本為EV71 或CA16 陽性;FAM 及VIC 通道也可能均為陰性,說明樣本為非EV71 非CA16 的其他型別腸道病毒。

【檢測方法的局限性】

樣本檢測結果和樣本收集、處理、運送及保存質量有關,其中任何失誤都將會導致假陰性結果。如果樣本處理時沒有控制好交叉污染,可能出現(xiàn)假陽性結果。

【產品性能指標】

根據(jù)產品分析性能評估結果,本試劑盒的分析靈敏度為 1.0×103copies/ml。與感染部位相同或感染癥狀相似的其他病原體(乙型腦炎病毒、麻疹病毒、風疹病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、單純皰疹病毒、水痘病毒、腺病毒等)無交叉反應。

【注意事項】

1. 本產品僅用于體外診斷;

2. 實驗室管理應嚴格按照PCR 基因擴增實驗室的管理規(guī)范,實驗人員必須進行專業(yè)培訓,實驗過程嚴格分區(qū)進行(試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增和產物分析區(qū)),所用消耗品應滅菌后一次性使用,實驗操作的每個階段使用專用的儀器和設備,各區(qū)各階段用品不能交叉使用;

3. 為試劑和標本準備階段提供生物安全柜,實驗過程中穿工作服,帶一次性手套,使用自卸管移液器;

4. 試劑使用前要wan全解凍,8,000rpm 離心數(shù)秒后使用;

5. 標本制備區(qū)所用過的吸頭請打入盛有消毒劑的容器,并與廢棄物一起滅菌后方可丟棄;

6. 實驗完畢用 10%次氯酸或 75%酒精處理工作臺和移液器,然后用紫外線燈照射 20-30 分鐘;

7. 本試劑盒內陽性質控品應視為具有傳染性物質,操作和處理均需符合相關法規(guī)要求:衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則》和《醫(yī)療廢物管理條例》。

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