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目錄:優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 鼠痘(脫腳病)病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

鼠痘(脫腳病)病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
  • 鼠痘(脫腳病)病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 YLKBIO
  • 型號
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2024-07-18 12:40:14瀏覽次數(shù):404評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
貨號 YLK10405P 應用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 科研實驗 保存條件 低溫運輸,-20℃保存
有效期 12個月 試劑盒說明 不同批號的試劑盒組分不可交互使用
鼠痘(脫腳病)病毒探針法熒光定量PCR試劑盒鼠痘病毒(Mouse Pox Virus,MPV)會引起鼠痘,該病多呈爆發(fā)性流行,致死率較高,常造成小鼠全群淘汰,危害極大。

鼠痘(脫腳病)病毒探針法熒光定量PCR試劑盒


產(chǎn)品名稱:鼠痘(脫腳病)病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱:Mouse Pox Virus(MPV) Probe qPCR Kit

鼠痘病毒(Mouse Pox Virus,MPV)會引起鼠痘,該病多呈爆發(fā)性流行,致死率較高,常造成小鼠全群淘汰,危害極大。臨床表現(xiàn)以四肢、尾和頭部腫脹、潰爛、壞死甚至腳趾脫落為特征,故又稱脫腳病。本病毒的自然宿主為小鼠,不同品系小鼠的易感性差異很大。本病常感染野生小鼠,使野生小鼠成為另一種危險的傳染源,因此鼠痘(脫腳病)病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重  要作用。本產(chǎn)品就是以探針法熒光定量 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測鼠痘(脫腳病)病毒的試劑盒,它具有下列特點:

1.    即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2.    引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。

3.    提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。

4.    特異性高,引物是根據(jù)鼠痘(脫腳病)病毒 DNA 高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他微生物的 DNA 發(fā)生交叉反應。

5.    既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為 5

個數(shù)量級。

6.    本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應。

7.    本產(chǎn)品只能用于科研。

【試劑組成】

成分

包裝

2×Probe qPCR MagicMix

500 μL(紅蓋)

熒光PCR 專用模板稀釋液

1 mL綠蓋

超純水

1 mL白蓋

鼠痘(脫腳病)病毒探針法 qPCR 引物-探針混合液

150 μL棕色管)

鼠痘(脫腳病)病毒探針法   qPCR 陽性對照

(1×10E7   拷貝/μL)

50 μL黃蓋

使用手冊

1


【運輸及保存】

低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。


【自備試劑】樣品 DNA。


【注意事項】

一、稀釋標準曲線樣品(以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能

污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2,1。

2.    用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同。

3.    在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.    換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.    換槍頭,在 4 號管中加入 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E4 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.    重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7.    如果有 N 個樣品待提取,最好設(shè)置 N+2 個提取,多出的是 PC(樣品制備陽

性對照)和 NC(樣品制備陰性對照)。可以取陽性對照的 1000 倍稀釋液10μL 再加上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致,以此作為 PC。另外用水作為 NC。

8.    用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù) DNA/提取試劑盒兼容。

三、Probe qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9.    如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.    在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設(shè)

置完畢后才設(shè)置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好

后最后加):

成分/每管

樣品管

N+2

PCR 陰性

對照管

標準曲線

樣品管(1-6 管)

2×Probe qPCR MagicMix

10 μL

10 μL

10 μL

鼠痘(脫腳病)病毒探針法 qPCR

引物-探針混合液

3 μL

3 μL

3 μL

N+2 個待測 DNA 模板

7 μL

-

-

超純水

-

7 μL

-

6 步所得標準曲線樣品稀釋液

1-6 號)

 

-

 

-

7 μL1 號樣到 1

號管,2 號樣到 2

號管












11.  蓋上蓋子后上機,按下面參數(shù)進行 PCR:

過程

溫度

時間

預變性

95℃

10 min

 

PCR 反應

45 個循環(huán))

95℃

15 sec

55℃

30 sec

72℃

30sec采集 FAM 通道的熒

光信號)

四、數(shù)據(jù)處理

12.  如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品核酸濃度的 log 值,再推算出其濃度。

13.  如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于或等于 36。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 36 則為陽性。如果在 36-40 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 40,則為陽性。

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