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目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 水稻內源基因SPS核酸檢測試劑盒

水稻內源基因SPS核酸檢測試劑盒
  • 水稻內源基因SPS核酸檢測試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
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具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 YLKBIO
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2024-07-18 12:45:13瀏覽次數:347評價

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供貨周期 現貨 規格 50T
貨號 YLK10407P 應用領域 化工,生物產業
主要用途 科研實驗 保存條件 低溫運輸,-20℃保存
有效期 12個月 試劑盒說明 不同批號的試劑盒組分不可交互使用
水稻內源基因SPS核酸檢測試劑盒用于檢測轉基因植物的SPS基因,用于篩查待檢測植物中是否含有SPS成分。其檢測結果僅供參考。

水稻內源基因SPS核酸檢測試劑盒


產品名稱:水稻內源基因SPS核酸檢測試劑盒

英文名稱:Diagnostic Kit for SPS Gene DNA(Real-Time PCR Method)

本試劑盒適用于檢測轉基因植物的SPS基因,用于篩查待檢測植物中是否含有SPS成分。其檢測結果僅供參考。

本試劑盒用國家標準的SPS特異性引物和探針,用熒光PCR 技術進行轉基因成分的檢測。


【試劑組成】

     

       

酶液

50μL×1

SPS反應液

1.0mL×1

 SPS陽性質控品

50μL ×1

陰性質控品

250μL ×1

【運輸及保存】

低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。


【適用儀器】

ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf等系列熒光定量PCR檢測儀。

 

【標本采集】

稱取200g樣品。

 

【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個月,標本運送應采用0℃冰壺。


【注意事項】

1. 樣品處理(樣本處理區)

1.1 樣本前處理

固體樣本:用粉碎機或冷凍研磨儀將樣品研磨至細粉狀。

1.2 DNA提取

對于固體標本,DNA的提取可以采用SN/T 2584-2010中推薦的方法:

1) 每個樣品取2個平行管。稱取200mg粉碎的樣品,加入1mL預冷至4℃的抽提液,劇烈搖動混勻后,在冰上靜止5min,4℃條件下10000g離心15min,棄上清液;

2) 加入600uL預熱至65℃的裂解液,充分重懸沉淀,在65℃恒溫保持40min,期間顛倒混勻5次;

3) 室溫條件下10000g離心10min,取上清液轉移至新離心管中,加入5uLRNAseA,37℃恒溫30min,分別用等體積苯/酚:異戊醇溶液和三氯jia烷:異戊醇溶液各抽提一次;

4) 室溫條件下,10000g離心10min,取上清液至新離心管,加入三分之二體積的異丙醇,十分之一體積的3mol/L的乙酸鈉溶液(pH=6.5),-20℃放置2-3h;

5) 在4℃條件下,10000g離心15min,棄上清液,用70%乙醇洗滌沉淀一次,倒出乙醇,晾干沉淀;

6) 加入50uL TE(pH8.0)溶解沉淀,所得溶解即為樣品DNA溶液。

也可使用等效的DNA/提取試劑盒。

油脂樣本請直接選用市售油脂DNA/提取試劑盒,按說明操作。

 

2. 試劑配制(試劑準備區)

根據待檢測樣本總數,設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照;樣品每滿7份,多配制1份),每測試反應體系配制如下表:

試劑

 SPS反應液

酶液

用量

20μL

1μL

 



3. 加樣(樣本處理區)

將步驟1提取的DNA、陽性質控品、陰性質控品各取4μL,加入相應的

反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR擴增(核酸擴增區)

4.1將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內;

4.2設置好通道、樣品信息,反應體系設置為25ul;熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)選擇NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

4.3推薦循環參數設置:

步驟

循環數

溫度

時間

收集熒光信號

1

1 cycle

95

10min

2

40 cycles

94

15sec

55

30sec

 





5. 結果分析判定

5.1 結果分析條件設定

設置Baseline和Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像調節Baseline的start值(一般可在3~15范圍內調節)、stop值(一般可在5~20范圍內調節),以及Threshold的Value值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

5.2 結果判斷

陽性:檢測通道Ct值≤35,且曲線有明顯的指數增長曲線;
可疑:檢測通道35<Ct值≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為35<Ct值≤38,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結果Ct值>38或無Ct值。

 

6. 檢測方法的局限性

樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;

樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;

陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;

病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;

不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;

試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果;

本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

 

7. 質控標準

陰性質控品:Ct>38或無Ct值顯示;

陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且Ct值≤32;

以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

 

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行;

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化,wan全混勻并短暫離心;

3.反應液應避光保存;

4.反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;

7.實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

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