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目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>PCR試劑盒>> 新型布尼亞病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

新型布尼亞病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
  • 新型布尼亞病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 YLKBIO
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2024-07-18 13:45:17瀏覽次數:355評價

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供貨周期 現貨 規格 50T
貨號 YLK10408P 應用領域 化工,生物產業
主要用途 科研實驗 保存條件 低溫運輸,-20℃保存
有效期 12個月 試劑盒說明 不同批號的試劑盒組分不可交互使用
新型布尼亞病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒新型布尼亞病毒,衛生部門從蜱蟲中毒者體內分離出的病毒。或將被認定為一種新型病毒。

新型布尼亞病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒


產品名稱:新型布尼亞病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

英文名稱:Novel Bunyavirus Probe qRT-PCR Kit

新型布尼亞病毒,衛生部門從蜱蟲中毒者體內分離出的病毒。或將被認定為一種新型病毒。從目前來看,這一病毒主要由蜱傳播,且可以治療,病死率很低。目前未發現人傳染人的病例。布尼亞病毒自然感染見于許多脊椎動物和節肢動物 (蚊、蜱、白蛉等),可感染小鼠,并能在一些哺乳類、鳥類和蚊細胞培養中生長;   對人可引起類似流感或登革熱的疾病、出血熱(立夫特谷熱和克里米亞─剛果出血熱等)及腦炎(加利福尼亞腦炎)。有蚊媒、蜱媒、白蛉媒 3 種傳播類型。本產品以探針法熒光定量 RT-PCR 技術為基礎開發的專門檢測新型布尼亞病毒的試劑盒, 它具有下列特點:

1.    即開即用,用戶只需要提供樣品 RNA 模板。

2.    引物和探針經過優化,靈敏性高。

3.    提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。

4.    特異性高,引物是根據新型布尼亞病毒高度保守區設計,不會跟其他病毒的

RNA 發生交叉反應。

5.    本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應。

6.    本產品只能用于科研。


【試劑組成】

成分

十孔盒包裝

探針法 qRT-PCR 緩沖液

500 μL藍蓋

探針法 qRT-PCR 酶混合液

100 μL紅蓋

熒光PCR 專用模板稀釋液

1 mL黃蓋

新型布尼亞病毒探針法 qRT-PCR

引物混合液

100 μL(白蓋)

新型布尼亞病毒 qRT-PCR 探針

50 μL棕色管

新型布尼亞病毒探針法 qRT-PCR

陽性對照

(1×10E8 拷貝/μL)

50 μL黃蓋

使用手冊

1

【運輸及保存】

低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。


【自備試劑】

樣品 RNA。


【注意事項】

一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。

由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原, 本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。

1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2.    用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。

3.    在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4.    換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5.    換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6.   重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 RNA 的制備

7.    如果有 N 個樣品,最好設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽

性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL 陽性對照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣, 以此作為PC。另外用水作為 NC。

8.    用自選方法純化樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA/提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。

三、Probe qRT-PCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9.    如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10.    在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好

后最后加):

成分樣品管N+2個RT-PCR陰性對照管標準曲線樣品管(2-7管)
探針法 qRT-PCR 緩沖液各 10 μL10 μL各 10 μL
探針法 qRT-PCR 酶混合液各 2 μL 2 μL各 2 μL
新型布尼亞病毒 qRT-PCR 探針各 1 μL 1 μL各 1 μL

新型布尼亞病毒探針法 qRT-PCR引物混合液

各 2 μL 2 μL各 2 μL
待測樣品 RNA 模板各 5 μL--
超純水
5 μL-

第 7 步所得標準曲線樣品稀釋液(2-7 號)

--

各 5 μL(2號樣到 2 號管,3 號樣到3 號管…)









11.    蓋上蓋子后上機,按下面參數進行 qRT-PCR:

過程

溫度

時間

逆轉錄

50℃

30 min

預變性

94℃

10 min

qRT-PCR 反應

40 個循環

94℃

15 sec

60℃

1 min采集 FAM 通道的熒光信號

五、數據處理

12.    如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸,以 Ct 值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

13.    如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照 Ct 必須大于或等于 40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct 值應該小于或等于 30。對待測樣品,如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性,如果小于或等于 35 則為陽性。如果在 35-40 之間,則重復一次。重復實驗的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性,如果小于 35,則為陽性。

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