l 血清
血清是生長和附著因子、礦物質、脂質和激素的來源,是細胞培養(yǎng)的重要組分。血清能調節(jié)細胞膜的通透性,同時能作為載體攜帶酶、脂質、酶和微量元素等進入細胞。
l 血清使用的常見問題
Q1. 收到的血清有部分解凍的現(xiàn)象,影響后續(xù)使用嗎?
正常情況下,血清應冷凍送達。但是如果血清有部分解凍,仍可繼續(xù)使用。血清在解凍后,根據(jù)實驗需求分裝成單次用量后再進行儲存以供后續(xù)使用。
Q2. 血清需要避光保存嗎?
正常情況下,在室內或實驗室燈光的照明下,不影響血清的使用。但不建議將血清暴露在波長短或強度高的光下,因為血清中含有一些對光敏感的成分。
Q3. 血清必須熱滅活嗎?
熱滅活可以破壞血清中補體的活性。哺乳動物血清中存在的補體蛋白參與細胞的溶解,收縮平滑肌,刺激細胞和血小板釋放組胺,并激活淋巴細胞和巨噬細胞。有研究比較了正常熱滅活胎牛血清對各種細胞株的生長能力影響(如下圖所示),發(fā)現(xiàn)11株細胞中,熱滅活對6株細胞有負面影響(紅框)、3株無影響(綠框)、2株有微弱正面改善(黃框),因此在多數(shù)細胞培養(yǎng)中血清不需要熱滅活,熱滅活對細胞生長沒有明顯的促進作用,反而還會影響血清質量,使細胞的生長速率降低。因此如果不是非必須,可不必做血清熱滅活這一處理。
圖1 使用未滅活或滅活血清的細胞生長狀況
Q4. 培養(yǎng)哪些細胞需要熱滅活血清?
培養(yǎng)胚胎干細胞(ESC)、平滑肌細胞、免疫細胞和昆蟲細胞時,建議使用熱滅活血清。
Q5. 血清如何熱滅活?
有研究表明,熱滅活時若水浴溫度過高或加熱時間過長,都會降低血清的性能,從而影響細胞生長(如下圖2和3所示)。因此建議將血清加熱至56 °C,持續(xù)30分鐘進行熱滅活。
圖2 使用不同溫度熱滅活血清對細胞生長的影響
圖3 使用不同時間熱滅活血清對細胞生長的影響
注意:滅活時,若使用水浴槽,請保持水面與血清液面等高。滅活后,建議使用冷水浴降溫。
Q6. 什么是γ-輻照血清?
γ-輻照是將血清暴露于25-35 kGy劑量的鈷-60源,使病毒和支原體等其他微生物菌體失活。γ-輻照不會降低血清的理化特性或細胞培養(yǎng)性能。
Q7. FBS的顏色與之前的批次不一樣。這會影響血清性能嗎?
血清中含有微量的血紅蛋白,血清的顏色取決于血紅蛋白濃度,顏色的深淺和血清的性能無關。
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