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生化試劑試驗步驟有哪些 :
1、貼壁細胞用yí酶消化,離心收集。
2、細胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次,離心收集。試驗步驟2再重新作一邊。
3、加入5mlDNA提取緩沖液,(10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS),混勻。
4、加入25ul蛋白酶K,使終濃度達到100ug/ml,混勻,50℃水浴3h,
5、用等體積的酚抽提一次,2500rpm離心收集水相,用等體積的(酚,異戊醇)混合物抽提一次,2500r/min離心收集水相
6、用等體積的,異戊醇抽提一次。加入等體積的5mol/L的LiCL,混勻,冰浴,10min.。
7、2500rpm離心10min.轉上清于一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10min。2500rpm,離心10min。棄上清。
8、加入0.1倍體積3mol/L乙酸鈉(PH5.2)與2倍體積-20℃預冷無水乙醇。-20℃20min。
9、12000r/min,室溫離心5min。棄上清。將DNA溶于適量TE中。
(以上實驗步驟可供各位老師參考.)
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