大鼠磷酸化細胞外信號調節激酶（pERK)elisa試劑盒試驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中調亡蛋白酶因子1(Apaf-1)水平。用純化的調亡蛋白酶因子1(Apaf-1)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入調亡蛋白酶因子1(Apaf-1),再與HRP標記的調亡蛋白酶因子1(Apaf-1)抗體結合，形成抗體抗原酶標抗體復合物，經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的調亡蛋白酶因子1(Apaf-1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中調亡蛋白酶因子1(Apaf-1)濃度。

大鼠磷酸化細胞外信號調節激酶（pERK)elisa試劑盒
自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

操作注意事項:

1． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀釋過后的標準品應丟棄，不可保存。

2． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。

3． 不用的其它試劑，應包裝好或蓋好，不同批號的試劑不要混用，保質前使用。

4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液，使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

7． 底物A易揮發，避免長時間打開蓋子，底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒，實驗完成后應立即讀取OD值。

8． 加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

9． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

操作步驟:

1． 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2． 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，每個標準品和空白孔建議做復孔，每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應孔內。

3． 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體，蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。

4． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次，如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5． 每孔加入50ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6． 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作3次，如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7． 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。

8． 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9． 在450nm波長處測定各孔的OD值。

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