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品名:微生物elisa檢測試劑盒
規格:96T/48T
貨號:BLL102897E
檢測范圍:37.5-1200pg/mL
原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中調亡蛋白酶因子1(Apaf-1)水平。用純化的調亡蛋白酶因子1(Apaf-1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入調亡蛋白酶因子1(Apaf-1),再與HRP標記的調亡蛋白酶因子1(Apaf-1)抗體結合,形成抗體抗原酶標抗體復合物,經過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的調亡蛋白酶因子1(Apaf-1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中調亡蛋白酶因子1(Apaf-1)濃度。
自備材料:
1.蒸餾水。
2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3.振蕩器及磁力攪拌器等。
操作注意事項:
1. 試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀釋過后的標準品應丟棄,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3. 不用的其它試劑,應包裝好或蓋好,不同批號的試劑不要混用,保質前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A易揮發,避免長時間打開蓋子,底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒,實驗完成后應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
操作步驟:
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數,每個標準品和空白孔建議做復孔,每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的標記的抗體,蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次,如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入50ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次,如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
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