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1.原理:免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結合原理,對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法,酶聯(lián)免疫吸附分析(下稱ELISA)是免疫分析的一種,分三個部分組成:免疫識別,信號輸出和數(shù)據(jù)處理。
2.步驟:免疫識別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體,而后利用抗體識別待測的抗原(通常是疾病的蛋白質生物標記物,病毒,細菌等等,從復雜待測液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶(Horseradish Peroxidase, HRP)、熒光或放射性標記的抗體通過直接或者間接的方式輸出識別信號。后利用信號強度,標準樣品濃度梯度等信息計算得出待測樣中目標抗原的濃度。
3.分類:根據(jù)免疫識別和信號輸出方式的不同,ELISA可以分為雙抗體夾心法、直接免疫競爭法和非直接免疫競爭法等等。其中雙抗體夾心法在商業(yè)應用上常見。
人抗壞血酸過氧化物酶ELISA試劑盒注意事項:
1.所有的操作過程一般都用排槍處理,在操作過程中,排槍吸兩檔打一檔,會防止氣泡的產(chǎn)生,并且操作時一定要保證槍頭每步都要插緊,選擇配套的槍頭尤為重要,槍頭容易掉,影響實驗效果,此外每一步都要看好槍頭的頁面要平齊,避免槍頭松動自己卻不知。
2.在處理稀釋標準品的過程中,要在渦旋儀上點一下,使混勻,但振蕩過程不宜過長,防止出現(xiàn)蛋白質降解變性的現(xiàn)象
3.二抗的稀釋濃度對顯色效果起著至關重要的作用,每次選用新的二抗或在-80度冰箱拿分裝好的二抗是每一次都做一個預實驗,設置不同的二抗?jié)舛群惋@色時間,從而確定相應的條件,方可做好大規(guī)模的篩選細胞工作。
4.同種細胞株的ELISA孵育時間要保持一致,降低無關變量的影響。
5.各種抗體的保存是在-80度冰箱,一定要將降低凍融次數(shù),蛋白比較敏感,凍融次數(shù)多,蛋白活性就會降低。
6.稀釋樣品時一定要保證混勻,槍尖在液面以下吹打相同的次數(shù),可防止出現(xiàn)氣泡。
7.分析數(shù)據(jù)的過程中,一般至少要5個點,不然數(shù)據(jù)沒有相應的說服力。
8.96孔板取完樣品后,蓋好,提早加好DPBS稀釋液,防止時間過長,樣品揮發(fā),濃度不準。
免責聲明:
1. 試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。
2. 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。
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