一、什么是細(xì)胞系
初代培養(yǎng)物開始次傳代培養(yǎng)后的細(xì)胞,即稱之為細(xì)胞系。如細(xì)胞系的生存期有限,則稱之為有限細(xì)胞系(Finite Cell Line);已獲無限繁殖能力能持續(xù)生存的細(xì)胞系,稱連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系 ( I n f i n i t e C e l l L i n e ) 。
二、介紹
細(xì)胞系缺少系統(tǒng)命名的標(biāo)準(zhǔn),導(dǎo)致了細(xì)胞系的錯(cuò)誤鑒定,交叉污染以及缺乏注釋等問題。
三、細(xì)胞生物學(xué)研究狀況
細(xì)胞系作為正常或腫瘤組織的模式細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物開發(fā),然而很大一部分的細(xì)胞系被錯(cuò)誤標(biāo)記或被其它個(gè)體、組織、種系來源的細(xì)胞所替代 。
在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域,文章一直在發(fā)表,科研成果一直在公布,但是當(dāng)中哺乳動(dòng)物細(xì)胞被錯(cuò)誤鑒定,存在交叉污染的情況也同時(shí)存在著。
2010年《國際癌癥雜志》(IJC)統(tǒng)計(jì)出一列表,在346篇文章中,有 103篇存在細(xì)胞被
Hela細(xì)胞污染的情況。
建立的大鼠(rat)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)的細(xì)胞系,命名為RGC-5。在隨后的十幾年時(shí)間里,至少230篇論文的研究與假設(shè)是建立在這株細(xì)胞系上。結(jié)果在2009年,序列測定結(jié)果表明,RGC-5是一株小鼠(mouse)細(xì)胞。
四、細(xì)胞系交叉污染
五、細(xì)胞交叉污染來源
1. 通過其他實(shí)驗(yàn)室饋贈(zèng)獲得細(xì)胞系
2. 細(xì)胞系的長時(shí)間連續(xù)培養(yǎng)
3. 使用滋養(yǎng)層細(xì)胞
4. 培養(yǎng)瓶的錯(cuò)誤標(biāo)記
5. 同時(shí)操作多種細(xì)胞系
6. 多種細(xì)胞系公共使用同一培養(yǎng)基
7. CO2培養(yǎng)箱
細(xì)胞錯(cuò)誤鑒定的后果
1. 細(xì)胞系的損失
2. 時(shí)間和金錢的損失
3. 在公眾領(lǐng)域(文獻(xiàn)等)提供錯(cuò)誤信息
4. 造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不一致或不可重復(fù)
5. 個(gè)人:尷尬;公眾:羞辱
如何減少細(xì)胞系交叉污染
1. 從信譽(yù)良好的組織或機(jī)構(gòu)獲得細(xì)胞系
2. 良好的文檔編制方法
3. 訓(xùn)練有素的技術(shù)操作員
4. 每種細(xì)胞系單獨(dú)使用培養(yǎng)基
5. 溶液或試劑分裝使用
6.常規(guī)性地注意細(xì)胞系身份以及其特性是否發(fā)生污染
7.早期做好充足的凍存儲(chǔ)備
8.細(xì)胞培養(yǎng)代數(shù)不要太高
何時(shí)需做細(xì)胞系鑒定
1、發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費(fèi)前;
2、使用細(xì)胞進(jìn)行臨床治療(試驗(yàn))前;
3、準(zhǔn)備凍存保種或已凍存多年的細(xì)胞;
4、一個(gè)涉及到細(xì)胞試驗(yàn)項(xiàng)目開始/結(jié)束時(shí);
5、新得到的細(xì)胞或?qū)嶒?yàn)室培養(yǎng)5代以上的細(xì)胞;
6、細(xì)胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大;
已開始要求細(xì)胞系鑒定的期刊
Cell
Nature;
Bio Techniques;
Cancer Research;
Cancer Discovery;
Clinical Cancer Research;
Molecular Cancer Research;
Cancer Prevention Research;
International Journal of Cancer;
Molecular Cancer Therapeutics;
Cell Biochemistry and Biophysics;
Cancer Epidemiology, Biomarkers & Prevention;
In Vitro Cellular & Developmental Biology – Animal
六、細(xì)胞系的鑒定方法
1)鑒定細(xì)胞的種系來源:常用方法主要有染色體分析、同工酶分析(乳酸脫氫酶,嘌呤核苷磷酸化酶,葡萄糖-6-磷酸脫氫酶,蘋果酸脫氫酶等)、DNA指紋圖譜等技術(shù)。
2)鑒定細(xì)胞的組織來源:可通過形態(tài)學(xué)手段(上皮細(xì)胞樣 ,成纖維細(xì)胞樣 ,淋巴母細(xì)胞樣等 )、檢測組織特異性抗原等進(jìn)行鑒定。
3)細(xì)胞是否發(fā)生轉(zhuǎn)化和惡變:主要通過核型分析、細(xì)胞生長行為觀 察(是否喪失接觸抑制)等進(jìn)行鑒定。
4)細(xì)胞有無發(fā)生交叉污染:主要通過同工酶及DNA指紋圖譜技術(shù)進(jìn)行鑒定。
七、不同細(xì)胞鑒定技術(shù)比較細(xì)胞系鑒定與STR
STR(Short TandemRepeat,短串聯(lián)重復(fù)序列)基因分型已被ICLAC、ATCC等機(jī)構(gòu)作為金標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用于細(xì)胞鑒定 。
細(xì)胞STR數(shù)據(jù)庫
美國的ATCC 細(xì)胞庫
德國的DSMZ細(xì)胞庫
日本的RIKEN細(xì)胞庫
日本的JCRB細(xì)胞庫
STR位點(diǎn)數(shù)分辨率比較
細(xì)胞系鑒定服務(wù)
為了進(jìn)一步提高鑒定的分辨率,除了包含ATCC檢測的8個(gè)STR和1個(gè)性別決定位點(diǎn)Amelogenin外,另新增了11個(gè)高度多態(tài)性位點(diǎn) ,共檢測20個(gè)STR位點(diǎn)。