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深圳艾瑞斯伏馬毒素B1檢測(cè)試劑盒原理及用途
伏馬毒素(Fumonisins)是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素,目前已知有28種衍生物,研究表明伏馬毒素可引發(fā)馬的白腦軟化癥,豬的肺水腫綜合癥,此外,還可誘發(fā)人類的食道癌和肝癌、胃癌等疾病,對(duì)畜牧業(yè)和人類的健康構(gòu)成危害。
伏馬毒素B1檢測(cè)試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的伏馬毒素和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗伏馬毒素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含伏馬毒素含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較乘以樣本稀釋倍數(shù)即可得出樣本中伏馬毒素的殘留量。
二、 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.5ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~15min
2.3 檢測(cè)下限:
玉米、飼料…………………………50ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
伏馬毒素…………………………100%
2.5 樣本回收率:
飼料…………………………………95%±15%
玉米…………………………………100±15%
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
10X濃縮復(fù)溶液(黃蓋)……………50ml
20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
說明書………………………………1份
三、酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
1 編 號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘。
3 洗 滌:小心揭開蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
4 顯 色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。
5 終 止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
四 結(jié)果分析
1 百分吸光率的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光度值(%)= A ×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來電索取)
五 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。