Incucyte® 實時活細胞分析系統因其操作簡便、可輕松進行實驗設置和分析、以及能夠直接放置于培養箱中進行自動拍攝而深受用戶的喜愛，極大地解放了科研人員的勞動力。Incucyte® 能夠精準計算各種細胞指標，在體外細胞水平的實驗中有著廣泛應用。
2023年全年，使用Incucyte® 發表CNS（Cell，Nature，Science三個頂尖雜志主刊）的數量就達到了26篇（文章列表見文末）！甚至在一個星期內出現了三篇Nature的壯舉（一周3篇Nature：Incucyte上演科研帽子戲法！）。截止至今，應用Incucyte® 的文章總數已經超過了15,000篇！
今天陳老師就帶大家一起來盤點一下這26篇CNS文章：
圖1. 按照實驗類型的應用統計
Incucyte® 的應用非常廣泛，通過分析這些CNS文章可以發現，除了傳統的細胞增殖、凋亡和劃痕遷移實驗外，它還被應用于細胞融合、病毒轉染、病毒中和實驗等應用。甚至有僅僅使用Incucyte®配套試劑的CNS文章出現[1]，由此可見，Incucyte®不僅儀器好用，其配套的試劑盒也很受歡迎。
圖2.按研究方向分類
Incucyte® 在學術研究中的應用也很廣泛，除了各種細胞治療和藥物研發項目，還涉及到基礎醫學研究等多個層面。值得一提的是，這些CNS文章中，也有國內學者（清華-北大生命科學聯合中心）的貢獻[2]。
接下來，就我們一起來看看其中幾篇比較有特色的文章。
免疫抑制阻斷治療（ICB）的新機制！[3]
很多以PD1/PDL1為免疫檢查點的抑制劑已被獲批用于治療具有錯配修復缺陷（MMR-d）的癌癥，這是一種精準的治療方法。在MMR-d癌癥中，常見到HLA基因的突變，這在理論上會阻止HLA依賴的CD8+T細胞識別并起到殺傷腫瘤細胞的作用，但是ICB依然有效果。本研究發現，除了CD8+T細胞，還存在第二道防線γδ T細胞（主要為Vδ1和Vδ3亞群）！γδ T 高表達PD-1和殺傷細胞免疫球蛋白樣受體（KIR），具有非HLA依賴途徑的細胞殺傷毒性。
將不同MMR-d的CRC（直腸癌）病人的PD1+（Vδ1或Vδ3細胞）和PD1-γδ T細胞的殺傷能力進行比較，發現PD1+γδ T細胞殺傷能力明顯強于PD1-。
Incucyte® 可以把長時間監測的圖像生成視頻，生成更直觀的數據！
異種生物器官移植不是夢![4]
生物科技公司eGenesis發布了一項突破性的研究成果，蟹猴（cynomolgus macaque）在移植人源化豬腎后存活超過2年！人源化豬腎總共經過69處基因組編輯，包含敲除了被認為會引起免疫排斥的三個聚糖抗原（3KO），過表達7種人類轉基因（7TG）以減少靈長類免疫系統的排斥反應，同時讓豬逆轉錄病毒基因的所有拷貝失活（RI）。實驗結果發現，攜帶人類轉基因的供體腎臟移植到食蟹猴中后可顯著延長存活時間。與接受僅敲除三聚糖抗原豬腎的對照組（3KO±RI）相比，那些接受含有敲除和人類轉基因豬腎移植的食蟹猴（3KO.7TG±RI）存活時間延長了七倍多——兩組的中位存活時間分別為24天和176天。在同時接受臨床相關免疫移植方案、屬于3KO.7TG±RI組中的一只食蟹猴，存活時間甚至超過2年（758天）。
在體外功能分析補體依賴性細胞毒性試驗實驗中，作者使用Incucyte® 活細胞分析系統和軟件計算Cytotox red陽性細胞的數量。補體依賴細胞毒性是通過將Cytotox red陽性細胞的數量歸一化到細胞總數來計算的。
圖3. 當與人或食蟹猴血清孵育45分鐘時，WT內皮細胞被溶解，而3KO（橙色組）修飾幾乎完全消除了人血清的補體依賴性細胞毒性，但沒有消除食蟹猴血清，這說明食蟹猴血清具有較強的抗豬細胞毒活性；當孵育時間延長至15h時，3KO修飾不足以完全保護細胞，即細胞被人血清殺死；3KO.7TG±RI（藍色組）對人和食蟹猴血清細胞毒性均有保護作用，超過3KO的保護作用
即使是終點法，Incucyte® 強大的分析軟件也可以派上用場，圖片作為原始數據清晰度也足夠。
胰腺癌新靶點 [5]
胰腺導管腺癌（PDA）因為有著局部浸潤和轉移擴散特征，是致死率最高的癌癥之一，目前缺乏轉移瘤特異相關的基因。本文分析了大量原發性和轉移性PDA腫瘤的RNA剪接數據，檢測到與RBFOX2基序高度相似的基序富集。在患者來源的異種移植物 （PDX）轉移性PDA細胞系X50中，RBFOX2的過表達大大降低了這些細胞在體外和體內的轉移潛力，而原發性胰腺腫瘤細胞系（BxPC3）中RBFOX2的耗竭增加了這些細胞的轉移潛力，并揭示了RBFOX2作為PDA中轉移抑制因子的作用,并提出了以RBFOX2為新靶點對轉移性PDA的治療方法。劃痕傷口愈合實驗是體外基因功能鑒定的重要手段，本文大量的此類實驗是由Incucyte® 完成的。
圖4. Incucyte® 劃痕愈合實驗測定：將每孔十萬個細胞接種到Incucyte® ImageLock板上24小時后， 用Incucyte® 傷口制造工具（Incucyte® WoundMaker）制造劃痕。以1小時的間隔成像24 h來監測細胞遷移；b圖，過表達RBFOX2的X50細胞系的減少了遷移能力；e圖，用CRISPR編輯RBFOX2后的BxPC3細胞系的遷移能力增強；h圖，用CRISPR編輯RBFOX2一個外顯子EIJ后的BxPC3細胞系的遷移能力增強，而過表達RBFOX2的BxPC3細胞系遷移能力減弱
Incucyte® 配備專門的劃痕工具，并且從平均劃痕寬度等方面來對劃痕多維度追蹤。每個實驗組有3個獨立實驗和8個重復，本文的Incucyte® 相關圖表數據超過10個，Incucyte® 可以一次監測6塊板，實驗組再多也不怕！
新冠病毒新受體發現[6]
已有研究通過CRISPR基因篩選技術發現TMEM106B是一種潛在的宿主受體，這是與大腦衰老有關的膜蛋白。比利時魯汶大學科學家使用X射線晶體學、低溫電子顯微鏡（cryo-EM）和氫氘交換質譜（HDX-MS）以及賽多利斯的Octet® 非標記分子互作系統和Incucyte® 實時活細胞分析系統等手段，從TMEM106B/S蛋白復合物結構解析角度進一步闡釋了TMEM106B與新冠病毒結合的分子機理。
圖5. Incucyte® 實時成像結果
細胞-細胞融合試驗：ACE2或TMEM106B、S蛋白（帶綠色熒光）轉染HEK293T細胞，使其在表面表達這些蛋白，如果TMEM106B與S蛋白有結合，細胞可以融合形成更大的細胞團；左圖：細胞融合成像；右圖：每隔3個小時拍攝一次，計算>1000um2的對象的熒光面積總和，并做實時圖譜；可見，轉染ACE2或TMEM106B細胞可以融合，但是TMEM106B突變M210和F210后無法實現融合
圖6. Octet® 數據：將TMEM106B固化在NTA傳感器上，與13.5uM的S1蛋白結合解離。TMEM106B與S蛋白有著明顯的結合，但是TMEM106B突變M210和F210位點后，就沒有結合了，證實了復合物結構解析的結論。
Octet® 和Incucyte® ，一個從分子水平闡述，一個從細胞水平證明，是基礎研究和藥物研發的好幫手，兩者結合1+1>2
總而言之，在上述研究中體現出Incucyte® 實時活細胞分析系統獨特優勢：
自動檢測，提升實驗效率：滿足密集時間點以及長時間監測的需求，一次實驗得到大量數據，解放人力，是從事細胞研究不可或缺的工具
分析簡便，提升數據質量：軟件采集及分析模塊配合熒光檢測試劑，得到高度可靠的數據。實時檢測整個細胞死亡/凋亡曲線，在細胞死亡狀況較為接近的情況下，仍然在大量數據的前提下得到確切的結論
6板位設計，多實驗同步開展：內設6個板位，可以分別獨立設置檢測程序，滿足6組不同實驗或多人實驗同時檢測的需求
配套完整的試劑和工具，可以實現各種活細胞以及腫瘤球、類器官的長時間觀察，以及趨化劃痕遷移實驗等
還是那句話，只要放好您的細胞，其他的交給Incucyte® 吧！
-參考文獻-
[1] Hideko Isozaki.et al.(2023).Therapy-induced APOBEC3A drives evolution of persistent cancer cells.Nature.620,393-401
[2] Yanrong Zhuang.et al.(2023).Circadian clocks are modulated by compartmentalized oscillating translation.Cell.186(15),3245-3260
[3] Natasja L. de Vriesγ.et al.(2023).δ T cells are effectors of immunotherapy in cancers with HLA class I defects.Nature.613,743-750
[4] Amina Jbara.et al.(2023).RBFOX2 modulates a metastatic signature of alternative splicing in pancreatic cancer.Nature.617,147-153
[5] Amina Jbara.et al.(2023).RBFOX2 modulates a metastatic signature of alternative splicing in pancreatic cancer.Nature.617,147-153
[6] Jim Baggen.et al.(2023).TMEM106B is a receptor mediating ACE2-independent SARS-CoV-2 cell entry.Cell.186(16),3427-3442
- 2023年使用Incucyte® 發表CNS -
Ralf Schmidt.et al.(2023).Base-editing mutagenesis maps alleles to tune human T cell functions.Nature.
免疫細胞殺傷，細胞治療
Mark Yarmarkovich.et al.(2023).Targeting of intracellular oncoproteins with peptide-centric CARs.Nature.
免疫細胞殺傷，細胞治療
Stella Victorelli.et al.(2023).Apoptotic stress causes mtDNA release during senescence and drives the SASP.Nature.622, 627-636
細胞凋亡，衰老機制
Ranjith P. Anand.et al.(2023).Design and testing of a humanized porcine donor for xenotransplantation.Nature.622, 393-401
細胞毒性，器官移植
Christina K. Baumgartner.et al.(2023).The PTPN2/PTPN1 inhibitor ABBV-CLS-484 unleashes potent anti-tumour immunity.Nature.622,850-862
細胞毒性，腫瘤藥物
Murad R. Mamedov.et al.(2023).CRISPR screens decode cancer cell pathways that trigger γδ T cell detection.Nature.621,188-195
免疫細胞殺傷，細胞治療
Yogesh Goyal.et al.(2023).Diverse clonal fates emerge upon drug treatment of homogeneous cancer cells.Nature.620,651-659
細胞增殖，腫瘤機制
Hideko Isozaki.et al.(2023).Therapy-induced APOBEC3A drives evolution of persistent cancer cells.Nature.620,393-401
細胞標記（試劑），腫瘤機制
Jiexi Li.et al.(2023).Histone demethylase KDM5D upregulation drives sex differences in colon cancer.Nature.619,632-639
細胞增殖，腫瘤機制
Nobuhiko Kayagakiet al.(2023)..Inhibiting membrane rupture with NINJ1 antibodies limits tissue injury.Nature.618,1072-1077
細胞轉染，創傷治療
Guoxun Wang.et al.(2023).Norovirus MLKL-like protein initiates cell death to induce viral egress.Nature.616,152-158
細胞凋亡，病原菌侵染機制
Amina Jbara.et al.(2023).RBFOX2 modulates a metastatic signature of alternative splicing in pancreatic cancer.Nature.617,147-153
劃痕遷移，腫瘤機制
Aidan M. Tousley.et al.(2023).Co-opting signalling molecules enables logic-gated control of CAR T cells.Nature.615,507-516
免疫細胞殺傷，細胞治療
Cristina Puig-Saus.et al.(2023).Neoantigen-targeted CD8+ T cell responses with PD-1 blockade therapy.Nature.615,697-704
免疫細胞殺傷，免疫治療
Joe Nassour.et al.(2023).Telomere-to-mitochondria signalling by ZBP1 mediates replicative crisis.Nature.614,767-773
細胞凋亡，衰老機制
Natasja L. de Vriesγ.et al.(2023).δ T cells are effectors of immunotherapy in cancers with HLA class I defects.Nature.613,743-750
免疫細胞殺傷，免疫治療
Nora Schmidt.et al.(2023).SND1 binds SARS-CoV-2 negative-sense RNA and promotes viral RNA synthesis through NSP9.Cell.186(22),4834-4850
病毒侵染，病原菌侵染機制
Franziska Blaeschke.et al.(2023).Modular pooled discovery of synthetic knockin sequences to program durable cell therapies.Cell.186(19),4216-4234
免疫細胞殺傷，細胞治療
Jim Baggen.et al.(2023).TMEM106B is a receptor mediating ACE2-independent SARS-CoV-2 cell entry.Cell.186(16),3427-3442
細胞融合實驗，病原菌侵染機制
Yanrong Zhuang.et al.(2023).Circadian clocks are modulated by compartmentalized oscillating translation.Cell.186(15),3245-3260
細胞增殖，晝夜調控機理
Balamurugan Sundaram.et al.(2023).NLRP12-PANoptosome activates PANoptosis and pathology in response to heme and PAMPs.Cell.186(13),2783-2801
細胞凋亡，焦亡機理
Christina M. Arieta.et al.(2023).The T-cell-directed vaccine BNT162b4 encoding conserved non-spike antigens protects animals from severe SARS-CoV-2 infection.Cell.186(11), 2392-2409
病毒中和實驗，疫苗
Stephen P. Burr.et al.(2023).Cell lineage-specific mitochondrial resilience during mammalian organogenesis.Cell.186(6),1212-1229
細胞增殖，器官發育
William A. Nyberg（2023）.An evolved AAV variant enables efficient genetic engineering of murine T cells.Cell.186(2), 446-460
免疫細胞殺傷，基因治療
PABLO RODRÍGUEZ-SILVESTRE.et al.(2023).Perforin-2 is a pore-forming effector of endocytic escape in cross-presenting dendritic cells.SCIENCE.380(6651)
細胞增殖，免疫機制
PHONG D. NGUYEN.et al.(2023).Interplay between calcium and sarcomeres directs cardiomyocyte maturation during regeneration.SCIENCE.380(6646)
細胞增殖，心臟再生
21
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務