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RNA提取原理RNA提取時，加lv仿后分三層：水相(含rna,可能還有少量DNA），中間白色薄層（應該是蛋白和DNA），下層有機相（lv仿和蛋白等）lv仿是分子量比較大的有機溶劑，在提取RNA時，lv仿可以有效的使有機相和無機相迅速分離。DNA提取過程有機相中主要是酚和蛋白結(jié)合，從而使得蛋白和DNA脫離，DNA進入水相。但是在RNA的提取過程就要避免蛋白和DNA脫離，否則DNA會釋放到水相。不管有酚也好，沒有酚也好，lv仿本身也對蛋白有變性作用，劇烈的震蕩，很容易使得DNA的親水基團，與水相接觸
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RNA甲基化（RNAmethylation）是一類表觀遺傳修飾，在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的超過100種不同的RNA化學修飾中，主要有6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）、5-甲基胞嘧啶（C5-methylcytidine,m5C）和1-甲基腺嘌呤（N1-methyladenosine,m1A）。RNA甲基化在調(diào)控基因表達、編輯、穩(wěn)定性及降解等方面扮演重要角色。早在20世紀70年代，人們已經(jīng)在真核生物的mRNA和lncRNA中發(fā)現(xiàn)了m6A修飾。但受制于技術(shù)的局限性，無法開展m6A檢測尤
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慢病毒包裝簡要程序：以六孔板中的1孔為例，每個樣品需要1×10∧6個293FT細胞。1、取1.5ml滅菌EP管，加入1.5μg包裝混合質(zhì)粒和0.5μg表達質(zhì)粒以及250μl的無血清OptiMEM。輕柔混勻，室溫孵育5min。2、取1.5ml滅菌EP管，取9μl脂質(zhì)體2000l溶于250μl無血清Opti-MEMI培養(yǎng)基中。輕柔混勻，室溫孵育5min。3、將DNA溶液和脂質(zhì)體溶液輕柔混勻。室溫孵育20min4、用胰酶消化并記數(shù)293FT細胞。用含血清的DMEM培養(yǎng)基重懸細胞。5、在六孔板中每孔，加
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一、自噬誘導劑(1)BredeldinA/Thapsigargin/Tunicamycin：模擬內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激(2)Carbamazepine/L-690，330/LithiumChloride（氯化鋰）：IMPase抑制劑（即Inositolmonophosphatase，肌醇單磷酸酶）(3)Earle's平衡鹽溶液：制造饑餓(4)N-Acetyl-D-sphingosine（C2-ceramide）：ClassIPI3KPathway抑制劑(5)Rapamycin：mTOR抑制劑(6)Xesto
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細胞培養(yǎng)中常見的污染情況總結(jié)如下:常見的污染如下：1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理2、霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡
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常見菌類污染情況圖片1.桿菌常見的有大腸桿菌，長度通常在2-5um左右。2.球菌常見的有葡萄球菌，直徑通常在1-2um左右。3.霉菌常見的有毛霉，菌絲寬2-10um左右，長度短則幾十um，長則可達幾mm。以上3種是細胞培養(yǎng)過程中常見的菌類污染，其共性是增殖快，適應能力強，很難*，一般如果確認培養(yǎng)細胞有以上污染，建議盡快丟棄，并檢查相關(guān)試劑和培養(yǎng)箱是否有污染，確認沒有后再重新復蘇。那么細胞如果還是不幸污染了，那又該怎么辦呢？我把細胞污染分為早期和晚期兩種。早期污染是細胞狀態(tài)變差，但依舊能保持生長，
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無論新人還是熟手，細胞污染都是必須要面對的，那對于細胞污染，我覺得zui好的措施就是預防為主，因為細胞一旦污染，想救是非常困難的，即便救活，細胞狀態(tài)也會差很多。所以我先來說下我是怎么預防細胞污染的。生物安全柜是處理細胞的主要場所，也是細胞發(fā)生污染的主要場所，所以安全柜的正確使用是預防細胞污染的di一步。那么安全柜內(nèi)需要注意的小細節(jié)有哪些呢？首先，所有進入安全柜的東西在進入前都要用75%的酒精消毒。特別要注意的是我們的手，只要出了安全柜，再進入安全柜前都要噴75%的酒精消毒。實驗耗材盡量放置在合適
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一、肉眼觀察以下幾項：1.細胞瓶身：如果瓶身上沒有裂縫，正常；如果瓶身上有裂縫，則污染幾率非常大。2.培養(yǎng)基顏色：如果培養(yǎng)基顏色是紅色或者粉色，正常；如果是橙色，則可能是污染或者細胞過密；如果是黃色，則污染幾率非常大。3.培養(yǎng)基澄清度：如果培養(yǎng)基澄清，正常；如果有少許漂浮物，則可能是污染或者有細胞凋亡；如果培養(yǎng)基很渾濁，甚至出現(xiàn)絮狀物，則污染幾率非常大。二、進行顯微鏡下觀察（通常觀察前需先靜置細胞1-2h）顯微鏡下可以清晰觀察到細胞是否有菌類污染，菌類污染通常分為桿菌、球菌和霉菌，為了方便大家分
