AlphaSureFire細(xì)胞激酶檢測(cè)試劑盒是由PerkinElmer 所研發(fā)出的新型態(tài)細(xì)胞內(nèi)磷酸化蛋白質(zhì)偵測(cè)技術(shù)。此技術(shù)幾乎不具有任何技術(shù)門檻，只要會(huì)使用Pipetman 就可以進(jìn)行實(shí)驗(yàn)！流程簡(jiǎn)單，從拿到待測(cè)檢體開始到取得偵測(cè)結(jié)果，只要三個(gè)步驟就能完成。Alpha SureFire 除了具有無技術(shù)門檻以及操作流程簡(jiǎn)單的特性之外，還擁有優(yōu)于Western Blot、ELISA 的偵測(cè)靈敏度與偵測(cè)區(qū)間，不但可減少樣品用量、提高解析度、并且具有量化的數(shù)據(jù)顯示方式，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)Western Blot 與ELISA 的不足之處。

本系列產(chǎn)品亦可適用于細(xì)胞內(nèi)非磷酸化蛋白質(zhì)的偵測(cè)，例如：GAPDH, Akt, Erk, p53, Topo IIa等。

AlphaSureFire細(xì)胞激酶檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn)：

偵測(cè)靈敏度高，細(xì)胞可不經(jīng)任何基因轉(zhuǎn)染(transfection) 或大量表現(xiàn)(over-expression) 過程，即可直接進(jìn)行偵測(cè)。

適用多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞株以及初代細(xì)胞(primary cell)。

全均質(zhì)化(homogeneous) 操作步驟，流程簡(jiǎn)單且不需分離或洗滌步驟，可快速完成偵測(cè)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品種類豐富，涵蓋各種熱門細(xì)胞訊息傳遞路徑，如：Akt, JAK/STAT, MAPK, mTOR, NF-kB, TGFb/Smad signaling pathway 等。

AlphaSureFire細(xì)胞激酶檢測(cè)試劑盒作用原理：

AlphaSureFire細(xì)胞激酶檢測(cè)試劑盒作用原理類似Sandwich ELISA，以「AlphaSureFire p-Erk」偵測(cè)試劑為例，當(dāng)cell lysates 樣品中含有待測(cè)的特定磷酸化蛋白質(zhì)"p-Erk" 時(shí)，帶有Erk 專一性抗體的Donor Bead、與帶有phospho Erk 專一性抗體的Acceptor Bead，就能夠經(jīng)由抗體與標(biāo)的蛋白間的專一性結(jié)合而靠近，此時(shí)以680 nm 雷射光激發(fā)Donor Bead，即可藉由能量轉(zhuǎn)移反應(yīng)測(cè)得Acceptor Bead 所發(fā)出的520-620 nm 螢光訊號(hào)。

AlphaSureFire細(xì)胞激酶檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品效能：

采用AlphaSureFire偵測(cè)平臺(tái)可得到量化的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，讓研究者能夠更清晰地辨識(shí)出實(shí)驗(yàn)組(CTL)與對(duì)照組(UV)之間的磷酸化蛋白質(zhì)表現(xiàn)差異程度。

AlphaSureFire可適用在Primary Cell的磷酸化蛋白質(zhì)偵測(cè)。

AlphaSureFire不需over-expression就能直接測(cè)得細(xì)胞內(nèi)原始的磷酸化蛋白質(zhì)含量。以未經(jīng)刺激活化過的HUVEC細(xì)胞作為研究對(duì)象，并以不同濃度的U0126抑制劑(MEK inhibitor, Calbiochem)或LY294002抑制劑(PI3K inhibitor, Calbiochem)分別投與HUVEC細(xì)胞培養(yǎng)皿中作用，接著以AlphaSureFire phospho-ERK Assay Kit (Cat# PK-TGRES500)來偵測(cè)HUVEC細(xì)胞內(nèi)的磷酸化ERK1/2含量。左圖為進(jìn)行三重復(fù)實(shí)驗(yàn)后所得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果顯示相較于用來作為對(duì)照組的非MAPK pathway抑制劑LY294002 2 (▲)，U0126抑制劑(●)的確可專一性地抑制MEK磷酸化ERK1/2的反應(yīng)，且其抑制活性IC50: 100 nM與1998年Duncia et al.研究團(tuán)隊(duì)發(fā)表于Bioorg Med Chem Lett.期刊的研究結(jié)果相似。 

 AlphaSureFire細(xì)胞激酶檢測(cè)試劑盒可供選購貨號(hào)