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AlphaLISA表觀遺傳學試劑是由Alpha技術所延伸出來的便利產品,可適用于偵測Peptide或Full-length型式的Histone蛋白。具有高度專一性,可藉由偵測各種后轉譯修飾類型的Histone蛋白,定量組蛋白密碼(histone code)調控者(例如Acetyltransferase, Methyltransferase, Deacetylase, Demethylase)的酵素活性。與ELISA產品相比,AlphaLISA偵測試劑具有更加寬廣的偵測區間,可減少樣品稀釋比例的測試步驟;并且具有更精簡快速的實驗流程,讓研究者能夠更快取得定量結果。
AlphaLISA表觀遺傳學試劑作用原理:
AlphaLISA 偵測技術是由兩種核心物質所組成,一為Donor bead,另一為Acceptor bead。Donor bead 本身身帶有光敏感物質"Phthalocyanine",因此當以680 nm 雷射光激發Donor bead 時,此光敏感物質可催化周遭的氧分子形成活化態,并于作用范圍內激發鄰近的Acceptor bead 產生化學冷光反應,此冷光能量會進一步轉移至Acceptor bead 本身所帶有的螢光物質,使其終產生615 nm 螢光訊號。與其他偵測平臺相比(例如FRET、TR-FRET),AlphaLISA 技術的能量轉移有效距離長達200 nm,因此不論是勝肽、重組蛋白、或是細胞內原始含有的蛋白質,皆可作為實驗偵測對象。具有專一性佳、靈敏度高、偵測區間廣泛以及流程簡單等多項優質特點。
在進行實驗時,研究者僅需自行準備(1). 待測酵素與輔因子(cofactor)、(2). 鍵結有Biotin 的Histone peptide substrate (或Histone 全長蛋白),即可開始進行實驗。此兩項所需試劑在產品應用文件中皆有詳盡的建議資訊,因此研究者可安心參照選購。
AlphaLISA anti-histone H3 K9me2 antibody Acceptor beads的專一性測試結果證實此試劑的確能夠專一性地辨識偵測H3K9me2 biotinylated peptide,并且無論是H3K9me1 peptides、H3K9me3 peptides、methylated H3K4 peptides、unmodified H3 peptides,皆無法干擾反應產生偽陽性結果。
所有Alpha系列的Histone modification偵測試劑,皆實際使用特定酵素進行完整測試,具有詳盡的測試條件與實驗流程可供參照。使用G9a Histone H3-Lysine N-methyltransferase所進行的酵素用量和時間反應測試結果,受測產品為Anti-methyl-Histone H3 Lysine 9 (H3K9me2) AlphaLISA® Acceptor Beads (需同時搭配Alpha Streptavidin Donor beads等產品使用)。其他測試項目包含:Cofactor titration (ex, SAM)、Enzyme inhibition、Z'-factor determination.
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