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杭州仟諾生物科技有限公司>>技術文章>>大鼠腎細胞 (NRK-52E)

大鼠腎細胞 (NRK-52E)

閱讀:1392        發布時間:2019/9/26
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細胞特性

1) 來源:大鼠,正常腎

2) 形態上皮細胞,貼壁生長

3) 含量:>1x106 個/mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式:1干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;2存活細胞,收到后應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

收到細胞后請拍照,3天內如果發現污染,請及時拍照與我們聯系。

 

細胞接受后的處理:

1) 收到細胞后,請檢查發貨培養瓶的狀況,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。

2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態時,在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態請在10X和20×物鏡下,同時給細胞拍照各2-3張(10×,20×都要拍照),作為售后的依據。

3) 觀察好細胞狀態后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。

4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現象,如發現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中(或新的培養瓶中)。

5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基)。

6)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。  收到細胞后第1次傳代建議1:2傳代 。

 

細胞用途:僅供科研使用。

                       

本公司細胞培養操作規程,供參考

一.培養基培養凍存條件準備:

1) 準備DMEM(推薦iCell-0001)培養基;小牛血清,10%;添加10ng/ml EGF;雙抗,1%

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%血清,10%DMSO,現用。

二. 細胞處理

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,可進行傳代培養。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2。

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3ml此細胞的培養基終止消化

3. 輕輕打后吸出,移入15ml離心管中,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養液后吹勻。

4. 移入到事先準備好的含有5ml培養基T-25培養瓶中或含有14ml培養基T-75培養瓶中培養

第1次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。

3) 細胞凍存:細胞生長狀態良好時,進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,先要消化處理并進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3驟進行,后的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心,用血清重懸浮DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106細胞凍存。

下面T25瓶為例;

      1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

      21000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

 

注意事項:

1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系

2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性,必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

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