微生物的新陳代謝
微生物在生長過程中,機體內的復雜代謝過程可以相互協調、相輔相成,導致微生物的生理活動過程同環境高度地統一起來,這也是微生物分布廣、適應性強的原因之一。微生物內外環境的統一都是通過新陳代謝來實現的。
一、代謝類型
在生物的機體內部存在著一系列復雜的代謝過程,根據這些代謝過程的生理作用可以將它們分為三個基本的代謝類型,即以產能和提供小分子中間體碳架物質為目的的分解代謝類型,以合成氨基酸、核苷酸等單體為目的的代謝類型和以合成蛋白質、核酸等多聚體為目的的代謝類型。每種代謝類型都是由一系列的有關代謝途徑組成,而且每一種代謝途徑都是由一些密切相關的、具體的酶促反應過程組成。本書中大多數培養基是用于細菌培養的,因此主要介紹細菌的新陳代謝。
細菌的新陳代謝包括一系列復雜的生化反應,都是在各種不同的酶的催化作用下進行的。細菌的代謝包括分解代謝(異化作用)和合成代謝(同化作用)兩個方面。分解代謝是將各種復雜的有機物質分解為簡單的小分子物質,并產生能量(ATP)和還原力,一方面提供合成菌體成分的原料,一方面從物質分解中獲取能量以供代謝所需。合成代謝則相反,它是將簡單的化合物合成為復雜的菌體成分,以保證紙菌的生長繁殖。分解代謝與合成代謝相輔相成,同時進行兩種代謝過程中均可生成多種中間代謝產物,其中有一些在醫學上有重要意義。
細菌的代謝與其他生物相比,具有下列特點:①代謝十分活躍。由于細菌菌體小,表面積大,與外界環境接觸密切,物質交換頻繁,營養物質可以很快被吸收,代謝產物可以迅速被排出,故細
菌的代謝活動非常活躍,大多數細菌約20min即可繁殖一代。②代謝類型多祥化,細菌的適應性很強,在各種不同的環境條件下,總有一些不同種類的細菌能適應于各種各樣環境條件,形成多種多樣的代謝類型。細萆代謝類型的多樣化,表現在各種細菌的營
養要求不同,能量來源、生物氧化類型不同,代謝產物亦各不相同。二、細菌的代謝過程
1.糖的分解營養物質中的多糖類物質,先經細菌分泌的胞外酶作用,分解為單糖(葡萄糖),然后才被吸收利用。由多糖—單糖丙酮酸這一基本過程,各菌都一樣,丙酮酸的進一步分解,則需氧菌與厭氧菌有所不同。需氧菌將丙酮酸通過三羧酸循環可*分解為二氧化碳與水,在此過程中亦可產生種種中間代謝產物;厭氧菌則發酵丙酮酸,產生多種酸類(如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、乳酸、琥珀酸等)、醛類(如乙醛)、醇類(如乙醇、乙酰甲基甲醇、2,3-丁烯-•.醇、異丙醇、丁醇等)、酮類(如丙酮)。在無氧條件下,不同細菌對丙酮酸發酵途徑不同,產物也不一樣。
2.蛋白質的分解蛋白質的分解,一般是先由細菌分泌胞外酶,將復雜的蛋白質分解為短肽(或氨基酸),吸收人菌體,然后再由胞內酶將肽類分解為氨基酸。明膠液化、酪蛋白胨化等,都是蛋白質分解的反應。能分解氨基酸的細菌很多,其分解能力也各不相同,気基酸的分解有脫氨與脫羧兩種方式。脫氨反應是靠細菌脫氨酶的作用,氨基酸經氧化、還原、分解等方式脫去気基,生成氨和各種酸類,如:
5(^H,GN+6^0-■谷氨酸6CH,COOH+2CH乙酸(CHj)2COOH+5NH,+5CO丁酸+1^脫羧作用則是由細菌的氨基酸脫竣酶之作用,使氨基酸的羧基脫出,生成胺類(如組織胺等)和二氧化碳。組織胺有擴張毛細血管、增加血管通透性的作用,可能和細菌感染后局部充血水腫有關。
3.細苗的合成代謝細菌的合成代謝與其他生物細胞相似,能利用營養物質為原料,合成菌體的各種成分如蛋白質、多糖、月旨類、核酸等,并能合成一些其他的代謝產物,分泌于菌體外。
三、細菌的代謝產物
(一)分解性代謝產物和細菌的生化反應
各種細菌所具有的酶不*相同,對營養物質的分解能力亦不一致,其代謝產物也不一樣,可借以區別和鑒定細菌的種類。通過生化試驗的方法檢測細菌對各種基質的代謝作用及其代謝產物,從而鑒別細菌的反應,統稱為細菌的生化反應(biochemicalre-action3)細菌的生化反應有許多種,常用的如下。
1.糖發酵試驗發酵糖類的細菌通常屬兼性厭氧菌,經發酵過程,糖類被分解和斷裂成兩個丙糖碳分子,再進一步分解成一些碳原子的化合物,最終產物因菌種不同而各異,因存在于該菌種的酶系統和環境條件不同,細繭分解糖類的能力和分解產物均不同,借此可以鑒別細菌。例如大腸埃希菌能分解乳糖和葡萄糖,而沙門菌只能分解葡萄糖,不能分解乳糖。大腸埃希菌有甲酸解氫酶,能將分解糖所生成的甲酸進一步分解為二氧化碳與氫氣,故產酸又產氣。
傷寒沙門菌無甲酸解氫酶,分解葡萄糖僅產酸而不產氣。
2.VP試驗用于檢査葡萄糖代謝產生的中性最終產物乙酰甲基甲醇,大腸埃希菌和產氣桿菌均能分解葡萄糖與乳糖,產酸產氣,二者不易區別。但產氣桿菌能使丙酮酸脫羧,生成中性的乙酰甲基甲醇(acetylmethylcarbinol),乙酰甲基甲醇在堿性溶液中被空氣中的氣所氧化,生成二乙酰(diacetyl),二乙酰與培養基中含有
這一反應稱為VP試驗(VogesProskauertest)陽性。大腸埃希菌不生成乙酰甲基甲醇,VP試驗陰性。有些細菌,特別是蜂房哈夫尼亞腸桿菌,在37弋培養時VP結果不穩定,但在25%:?30X:下則呈陽性。因此,懷疑為蜂房哈夫尼亞腸桿菌時,可重復VP試驗并在25%:培養。
3.甲基紅試驗(MR)是用酸堿指示劑甲基紅測定細菌發酵葡萄糖時產生的氫離子濃度(pH)。腸桿菌科的細菌都發酵葡萄糖,在葡萄糖肉湯中培養18~24h后引起發酵,腸道菌起初都呈甲基紅陽性反應,然后迸一步培養(2~5天)之后,那些甲基紅陽性菌繼續產生更多酸,培養基保持酸性(pH4.5或以下),例如大腸埃希菌分解葡萄糖時,故培養液酸性較強,pH在4.5或以下,甲基紅指示劑呈紅色,為甲基紅試驗陽性。甲基紅試驗陰性菌如產氣桿菌分解葡萄糖所產生的2分子酸性的丙酮酸轉變為1分子中性的乙酰甲基甲醇,故生成的酸類較少,培養液最終pH較高,在PH5.4以上,以甲基紅作指示劑時溶液呈橘黃色,為甲基紅試驗(methylredtt)陰性。甲基紅試驗的正確性取決于足夠的培養時間,35^?37T至少培養2天。
4.靛基質試驗檢査細菌分解色氨酸生成綻基質的能力,有些細菌如大腸埃希菌、普通變形桿菌、霍亂弧菌等含有色氨酸酶,如在培養液中加人對二甲基氨基(p-dimethylaminobenzaldehyde),則與吲哚結合生成玫瑰吲哚(rosindole)呈紅色。為吲哚試驗陽性。
堪亂弧菌除能分解色氨酸產生吲哚外,還能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。在濃硫酸存在時,亞硝酸鹽生成亞硝酸,吲哚與亞硝酸化合成亞硝基吲哚(nitroso-indole),亦呈紅色,此反應稱為霍亂紅反應(choleraredreaction)等)能分解胱氨酸生成硫化氫,如遇醋酸鉛或硫酸亞鐵,生成黑色的硫化鉛或硫化鐵,可借以鑒別細菌。
6.檸樣酸鹽利用試驗是否能利用擰檬酸鹽作為代謝的碳源,并使培養基呈堿性。某些細菌(如產氣桿菌)能利用擰檬酸鹽作為碳源,能在除擰檬酸鹽外不含其他碳源的培養基上生長,分解擰檬酸鹽生成碳酸鹽,使培養基(pH原在7.0以下)由酸性變為堿性,培養基中的指示劑溴麝香草酚藍(BTB)由淡綠色轉為深藍色,為擰檬酸鹽利用試驗陽性。大腸埃希菌不能利用擰檬酸鹽作為碳源,在此培養基上不能生長,培養基顏色不變,結果為陰性。