關于胎牛血清的7問7答
細胞培養中bibukeshao的就是胎牛血清,關于科研小伙伴們在使用胎牛血清中遇到的問題,小編整理了以下幾點并進行了解答,一起來看看吧。
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Q:血清應如何保存?
未拆封的血清應存放于 -15 ℃至 -20 ℃,避免反復凍融。拆封后的血清應無菌分裝成一次的用量并存放于 -15 ℃至 -20 ℃,2~8 ℃ 溶解后建議盡快使用。
Q:血清的有效期是多久?
大部分血清效期是 5 年,針對每個批次,請通過廠家質檢確定具體效期日期。
Q:血清應如何融解?
取出的血清置于 2~8 ℃ 融化,不時旋轉混勻,充分融解后分裝或使用。
Q:血清中出現絮狀沉淀是何原因?如何處理?
多種原因可能導致絮狀沉淀的形成,最常見的原因之一是融化過程中,脂蛋白聚集所致。該現象一般不會影響產品質量。可以 400 g 離心 5 分鐘,取上清,然后過濾。根據需要選擇合適的濾膜孔徑,一般常用的是 0.22 um PES 材質的濾膜。為避免濾膜阻塞,建議離心后取上清加入培養基內一起過濾而不是直接過濾血清。
Q:為什么存放于冰箱中的血清會出現沉淀?如何避免?
在 2~8°C 條件下存放,血清中的多種蛋白或脂蛋白會形成肉眼可見的沉淀,如血纖蛋白(fibrin),單體時處于溶解狀態,在凍融過程中會發生聚集,形成肉眼可見的沉淀。但該現象一般不會影響血清的性能。可以 400 g 離心 5 分鐘,取上清,然后過濾。根據需要選擇合適的濾膜孔徑,一般常用的是 0.22 um PES 材質的濾膜。為避免濾膜阻塞,建議離心后取上清加入培養基內一起過濾而不是直接過濾血清。為盡量避免出現上述現象,建議血清分裝成一次性用量存于 -15° 至 -20 ℃ 冰箱,避免反復凍融和融化后的血清在 2~8 °C 條件下長時間放置。
Q:血清是否需要做滅活處理?
滅活過程中,會導致血清中某些成分被破壞,如氨基酸,維生素,生長因子等。所以只有在您的實驗對血清有特殊要求時,才會考慮對血清進行滅活處理。如您的實驗對血清中的某種組分敏感,需要去除該組分。最常見的情況是需要去除血清中的補體蛋白,因為補體在機體中參與細胞殺傷,巨噬細胞和淋巴細胞活化,肥大細胞和血小板組胺釋放,平滑肌收縮等過程,所以一般在免疫學相關研究中及肌細胞和干細胞的培養過程中需要對血清進行滅活處理。
Q:如何進行血清滅活處理?
先將血清融化和混勻,熱滅活時請將其置于 56 ℃ 水浴 30 分鐘。為盡量減少熱滅活對血清品質的影響,一次滅活的血清體積不宜過大。最好準備同樣的容器裝相等體積的水(與血清相同溫度),滅活時將裝有血清和水的容器同時放入 56 ℃ 水浴, 在裝水的容器中放置溫度計,加熱過程中不時輕輕旋轉混勻血清,當溫度計顯示達到 56 ℃ 左右,開始計時。56 ℃ 水浴后,建議馬上轉移到冰上降溫。
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