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靶點科技(北京)有限公司

大腸桿菌誘導表達蛋白的原理和自誘導的新產品

時間:2024-6-5閱讀:792

誘導表達原理:

將外源基因克隆在含有Lac啟動子的表達載體中,讓其在大腸桿菌中表達。先讓宿主菌生長,LacI產生的阻遏蛋白與Lac操縱基因結合,從而不能進行外源基因的轉錄和表達,此時宿主菌正常生長。然后向培養基中加入Lac操縱子的誘導物IPTG,阻遏蛋白不能與操縱基因結合,則外源基因大量轉錄并高效表達。


大腸桿菌誘導表達蛋白的原理和自誘導的新產品

①Z、Y、A是指結構基因,用于表達性狀;

lacZ編碼β-半乳糖苷酶,它可以切斷乳糖的半乳糖苷鍵,而產生半乳糖和葡萄糖;

lacY編碼β-半乳糖苷透性酶,它構成轉運系統,將半乳糖苷運入到細胞中;

lacA編碼β-半乳糖苷乙酰轉移酶,只將乙酰-輔酶A上的乙酰基轉移到β-半乳糖苷上;

②I是指調節基因,調節分泌阻遏物或誘導物;

③O是指操縱基因,與阻遏蛋白的結合部位;

④P是指啟動子,啟動基因的轉錄和翻譯。

乳糖操縱子是參與乳糖分解的一個基因群,由乳糖系統的阻遏物和操縱序列組成,使得一組與乳糖代謝相關的基因受到同步的調控。1961年雅各布(F.Jacob)和莫諾德(J.Monod)根據對該系統的研究而提出了著名的操縱子學說。在大腸桿菌的乳糖系統操縱子中,β-半乳糖苷酶,半乳糖苷滲透酶,半乳糖苷轉酰酶的結構基因以LacZ(z), Lac Y(y),Lac A(a)的順序分別排列在質粒上,在z的上游有操縱序列Lac O(o),更前面有啟動子Lac P(p),這就是操縱子(乳糖操縱子)的結構模式。編碼乳糖操縱系統中阻遏物的調節基因Lac I(i)位于和p上游的鄰近位置。

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當使用自誘導培養基時,傳統這種使用IPTG,檢測OD600的過程都可以省略。靶點科技現貨自誘導培養基,此外,產量更高。但是對于包涵體的問題,需要優化。

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