人高轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

MHCC-97H+luc

細(xì)胞介紹

來源于中山醫(yī)院，用人肝癌細(xì)胞株MHCC97-H接種裸鼠，進(jìn)行3次肺轉(zhuǎn)移篩選，取肺轉(zhuǎn)移瘤建成皮下接種后高度自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移的肝癌細(xì)胞系。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。

細(xì)胞特性

1） 來源：肝癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣  貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x10^6  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其Luc熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。        

建議收到細(xì)胞后至少傳3代，凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí)，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的wan全培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的wan全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中，漂浮細(xì)胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥wan全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

產(chǎn)品的運(yùn)輸和保存

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1) 1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2) T-25培養(yǎng)瓶充滿wan全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

產(chǎn)品使用

1) 本產(chǎn)品僅能用于科研

2) 本產(chǎn)品未通過直接用于活體動(dòng)物和人的審核

3) 本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核

人高轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記相關(guān)細(xì)胞列表

人舌鱗癌細(xì)胞 CAL-27

人肺癌細(xì)胞 Calu-1

人肺腺癌細(xì)胞 Calu-3

人退行性癌細(xì)胞 calu-6

人卵巢腺癌細(xì)胞 CAOV-3

人胰腺癌細(xì)胞 Capan-1

人胰腺癌細(xì)胞 Capan-2

人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞 caki-1

人腎透明細(xì)胞癌 CAKI-2

人宮頸癌細(xì)胞 CaSKi

人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞(有限細(xì)胞系） CCD841 CON

人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 CCRF-CEM

人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 CEM/C1

人卵巢癌細(xì)胞 CoC1

人結(jié)腸癌細(xì)胞 COLO205

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320 DM

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320 HSR

人結(jié)腸癌細(xì)胞 CW-2

結(jié)腸癌細(xì)胞 cx-1

人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 D283 Med

人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 D341 Med

人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 DAMI

人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 DAOY

人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 DAUDI

人彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞 DB

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 DLD-1

人肺癌細(xì)胞 DMS 53

人前列腺癌細(xì)胞 DU145

人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞 EA.hy926

人食管癌細(xì)胞 Eca-109

人膀胱癌細(xì)胞 ECV-304

人膀胱癌細(xì)胞 EJ-1[EJ1]

人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞 ES-2

人腺癌細(xì)胞系 F56

人咽鱗癌細(xì)胞 FADu

人甲狀腺癌細(xì)胞 FTC-133

人膽囊癌細(xì)胞 GBC-SD

人膽囊癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 GBC-SD+LUC

人胃黏膜上皮細(xì)胞 GES-1

人肝癌細(xì)胞亞型（過表達(dá)谷氨酰氨合成酶） GS-HEPG2

人T淋巴瘤白血病細(xì)胞 H9/HTLV-IIIB

人胚胎干細(xì)胞H9 h9 Feeder Frec

人胚胎干細(xì)胞H1 h1

人永生化表皮細(xì)胞 hacat

人永生化表皮細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HACAT+LUC

人支氣管上皮細(xì)胞 HBE135-E6E7

人整合SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞 HBL-100

人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 HCC 38

人乳腺癌細(xì)胞 HCC1937

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 HCC827

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCC827+LUC

人子宮鱗癌細(xì)胞(高分化)  HCC-94

人膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞 hccc-9810

人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞 HCC-LM3

永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 HCMEC/D3

人結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT116

人結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCT116+LUC

人結(jié)腸癌細(xì)胞 hct-15

人結(jié)直腸癌耐藥株 HCT15/Fu

人結(jié)直腸癌耐藥株 HCT-15/Taxol

人結(jié)直腸癌癌細(xì)胞 HCT-8

人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-A

人子宮膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-B

人胚腎細(xì)胞 HEK-293（293）

人胚腎細(xì)胞 HEK-293A

人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞 HEL

人子宮頸癌細(xì)胞 HELA

人宮頸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HELA+LUC  

01 什么是細(xì)胞永生化？

   正常組織來源的細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下可分裂生長(zhǎng)，但經(jīng)過有限次數(shù)的傳代后，就會(huì)停止增殖，發(fā)生衰老和死亡，這種現(xiàn)象稱之為海夫利克極限。有的細(xì)胞自發(fā)或受外界因素的影響，可以從增殖衰老危機(jī)中逃離，從而擁有無限增殖的能力，該過程稱之為細(xì)胞永生化（cell immortalization）。

   細(xì)胞永生化是癌變的必經(jīng)途徑。

02 細(xì)胞永生化的方法？

   細(xì)胞自發(fā)永生化的幾率非常小，于人類細(xì)胞就更為罕見。

   人為干涉讓細(xì)胞永生化的方法包括：放射處理、端粒酶激活、病毒基因轉(zhuǎn)染、原癌基因激活、抑癌基因抑制等。其中，聽過慢病毒感染使細(xì)胞過表達(dá)猴腎病毒SV40 T抗原或人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶hTERT基因，是常用的兩種細(xì)胞永生化的方法。

01端粒酶激活

   端粒酶是一種能延長(zhǎng)端粒末端的核糖核蛋白酶，由RNA和蛋白質(zhì)組成。端粒酶能以自身的RNA為模板，從端粒DNA3’-OH 末端延伸端粒或合成新的端粒DNA， 以補(bǔ)償細(xì)胞分裂時(shí)染色體末端的縮短，從而維持端粒的長(zhǎng)度，使細(xì)胞不會(huì)因端粒耗盡而出現(xiàn)凋亡。

   正常情況下，大多數(shù)體細(xì)胞端粒酶的表達(dá)是嚴(yán)格調(diào)控的，表達(dá)是瞬時(shí)和低水平的。在原代培養(yǎng)的細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)人端粒酶催化亞基(hTERT)基因能穩(wěn)定端粒的長(zhǎng)度，使細(xì)胞易于永生化，因此hTERT的激活是細(xì)胞永生化的重要步驟。

   雖然激活端粒酶活性能夠使多種人和動(dòng)物的細(xì)胞永生化，但是對(duì)于有些細(xì)胞，重建端粒酶活性并不足以使細(xì)胞永生化，還需要借助癌基因法。

02癌基因法

   一些原癌基因，如Myc, c-Jun, c-Ias, vsrc和Mdm2，通過基因轉(zhuǎn)染可介導(dǎo)目的細(xì)胞永生化。c-Myc是最早被發(fā)現(xiàn)的原癌基因，有許多與瘤化相關(guān)的功能區(qū)域，其轉(zhuǎn)錄表達(dá)的蛋白通過核膜進(jìn)入細(xì)胞核與端粒酶的啟動(dòng)子結(jié)合位點(diǎn)特異性結(jié)合，誘導(dǎo)端粒酶mRNA快速表達(dá)，直接激活端粒酶活性，促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入永生化。

   細(xì)胞永生化過程中，抑癌基因如p53, pRb, BRCA1, DPC4等，通過等位基因隱性作用、抑癌基因的顯性負(fù)作用等逐漸失去活性，細(xì)胞老化途徑受阻。實(shí)驗(yàn)證明端粒酶的活性與抑癌基因表達(dá)產(chǎn)物的下調(diào)有相關(guān)關(guān)系，推測(cè)抑癌基因的失活協(xié)同端粒酶的激活共同參與細(xì)胞永生化進(jìn)程。

03病毒基因轉(zhuǎn)染

很多病毒感染能夠誘導(dǎo)細(xì)胞永生化，例如EB病毒(epstein-barr virus, EBV)、猿猴病毒40 (simian virus40, SV40)和人乳頭瘤病毒(human papillomavirus, HPV)。這些病毒感染其天然宿主細(xì)胞，能誘導(dǎo)細(xì)胞永生化。

   EBV能使B淋巴母細(xì)胞永生化形成淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系，它是通過潛伏蛋白激活細(xì)胞因子與其受體相互作用的途徑使細(xì)胞永生的。EBV永生化B細(xì)胞的一個(gè)顯著的特點(diǎn)是端粒酶活性的提高，這可能是導(dǎo)致B細(xì)胞永生的主要原因。目前，EB病毒介導(dǎo)的細(xì)胞永生化應(yīng)用最多的是B淋巴細(xì)胞，其他細(xì)胞中的應(yīng)用很少。

   SV40是簡(jiǎn)單的真核細(xì)胞病毒，SV40的T抗原片段是常用的目的片段，將其整合入靶細(xì)胞核內(nèi)并表達(dá)，可導(dǎo)致細(xì)胞增殖活力的改變并表現(xiàn)出多種與腫瘤相關(guān)的轉(zhuǎn)化顯型。應(yīng)用的方法包括：野生型SV40病毒共培養(yǎng)感染靶細(xì)胞、磷酸鈣法、電穿孔以及逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法等。

   HPV已成功將人的包皮細(xì)胞、角化上皮以及乳腺、胰導(dǎo)管和口腔等的上皮細(xì)胞永生化。HPV病毒的早期表達(dá)蛋白E6和E7在細(xì)胞永生化中起決定性作用。E6和E7蛋白能夠改變細(xì)胞的終末分化，誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入S期，使細(xì)胞繞過正常細(xì)胞的周期檢查點(diǎn)。