大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞
細(xì)胞詳述
膽管,輸送膽汁的管道。由肝分泌的膽汁,經(jīng)肝左、右管、肝總管、膽囊管進(jìn)入膽囊貯存,肝內(nèi)膽管的部分包括:左、右肝管;左內(nèi)葉、左外葉、右前葉、右后葉膽管;各肝段膽管;小葉間膽管;毛細(xì)膽管。
常見的膽管病變?nèi)缒懙篱]塞、原發(fā)性硬化性膽管炎、膽管癌等,都是以膽管上皮為病變靶位,因此研究膽管上皮細(xì)胞的生物學(xué)特性和病理變化有重要意義。在這些病變過程中,肝內(nèi)膽管上皮常暴露于常暴露于較高炎癥因子中,會表現(xiàn)細(xì)胞損傷和繼發(fā)性增值為特征的病理變化。
細(xì)胞特性
1) 細(xì)胞來源于實驗動物正常肝臟組織。
2) 細(xì)胞鑒定:細(xì)胞角蛋白19(CK-19)免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長方式:上皮樣,多角形細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
產(chǎn)品的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1) 1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸;收到細(xì)胞后請盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2) T-25培養(yǎng)瓶充滿wan全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運輸;收到細(xì)胞后請鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
產(chǎn)品使用
1) 本產(chǎn)品僅能用于科研
2) 本產(chǎn)品未通過直接用于活體動物和人的審核
3) 本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核
大鼠原代肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞列表
人舌鱗癌細(xì)胞 CAL-27
人肺癌細(xì)胞 Calu-1
人肺腺癌細(xì)胞 Calu-3
人退行性癌細(xì)胞 calu-6
人卵巢腺癌細(xì)胞 CAOV-3
人胰腺癌細(xì)胞 Capan-1
人胰腺癌細(xì)胞 Capan-2
人腎透明細(xì)胞癌皮膚轉(zhuǎn)移細(xì)胞 caki-1
人腎透明細(xì)胞癌 CAKI-2
人宮頸癌細(xì)胞 CaSKi
人正常結(jié)腸上皮細(xì)胞(有限細(xì)胞系) CCD841 CON
人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 CCRF-CEM
人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 CEM/C1
人卵巢癌細(xì)胞 CoC1
人結(jié)腸癌細(xì)胞 COLO205
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320 DM
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 COLO320 HSR
人結(jié)腸癌細(xì)胞 CW-2
結(jié)腸癌細(xì)胞 cx-1
人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 D283 Med
人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 D341 Med
人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 DAMI
人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 DAOY
人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞 DAUDI
人彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞 DB
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 DLD-1
人肺癌細(xì)胞 DMS 53
人前列腺癌細(xì)胞 DU145
人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞 EA.hy926
人食管癌細(xì)胞 Eca-109
人膀胱癌細(xì)胞 ECV-304
人膀胱癌細(xì)胞 EJ-1[EJ1]
人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞 ES-2
人腺癌細(xì)胞系 F56
人咽鱗癌細(xì)胞 FADu
人甲狀腺癌細(xì)胞 FTC-133
人膽囊癌細(xì)胞 GBC-SD
人膽囊癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 GBC-SD+LUC
人胃黏膜上皮細(xì)胞 GES-1
人肝癌細(xì)胞亞型(過表達(dá)谷氨酰氨合成酶) GS-HEPG2
人T淋巴瘤白血病細(xì)胞 H9/HTLV-IIIB
人胚胎干細(xì)胞H9 h9 Feeder Frec
人胚胎干細(xì)胞H1 h1
人永生化表皮細(xì)胞 hacat
人永生化表皮細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HACAT+LUC
人支氣管上皮細(xì)胞 HBE135-E6E7
人整合SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞 HBL-100
人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 HCC 38
人乳腺癌細(xì)胞 HCC1937
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 HCC827
人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCC827+LUC
人子宮鱗癌細(xì)胞(高分化) HCC-94
人膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞 hccc-9810
人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞 HCC-LM3
永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞 HCMEC/D3
人結(jié)腸癌細(xì)胞 HCT116
人結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCT116+LUC
人結(jié)腸癌細(xì)胞 hct-15
人結(jié)直腸癌耐藥株 HCT15/Fu
人結(jié)直腸癌耐藥株 HCT-15/Taxol
人結(jié)直腸癌癌細(xì)胞 HCT-8
人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-A
人子宮膜腺癌細(xì)胞 HEC-1-B
人胚腎細(xì)胞 HEK-293(293)
人胚腎細(xì)胞 HEK-293A
人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞 HEL
人子宮頸癌細(xì)胞 HELA
人宮頸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HELA+LUC
01 什么是細(xì)胞永生化?
正常組織來源的細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下可分裂生長,但經(jīng)過有限次數(shù)的傳代后,就會停止增殖,發(fā)生衰老和死亡,這種現(xiàn)象稱之為海夫利克極限。有的細(xì)胞自發(fā)或受外界因素的影響,可以從增殖衰老危機(jī)中逃離,從而擁有無限增殖的能力,該過程稱之為細(xì)胞永生化(cell immortalization)。
細(xì)胞永生化是癌變的必經(jīng)途徑。
02 細(xì)胞永生化的方法?
細(xì)胞自發(fā)永生化的幾率非常小,于人類細(xì)胞就更為罕見。
人為干涉讓細(xì)胞永生化的方法包括:放射處理、端粒酶激活、病毒基因轉(zhuǎn)染、原癌基因激活、抑癌基因抑制等。其中,聽過慢病毒感染使細(xì)胞過表達(dá)猴腎病毒SV40 T抗原或人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶hTERT基因,是常用的兩種細(xì)胞永生化的方法。
01端粒酶激活
端粒酶是一種能延長端粒末端的核糖核蛋白酶,由RNA和蛋白質(zhì)組成。端粒酶能以自身的RNA為模板,從端粒DNA3’-OH 末端延伸端粒或合成新的端粒DNA, 以補償細(xì)胞分裂時染色體末端的縮短,從而維持端粒的長度,使細(xì)胞不會因端粒耗盡而出現(xiàn)凋亡。
正常情況下,大多數(shù)體細(xì)胞端粒酶的表達(dá)是嚴(yán)格調(diào)控的,表達(dá)是瞬時和低水平的。在原代培養(yǎng)的細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)人端粒酶催化亞基(hTERT)基因能穩(wěn)定端粒的長度,使細(xì)胞易于永生化,因此hTERT的激活是細(xì)胞永生化的重要步驟。
雖然激活端粒酶活性能夠使多種人和動物的細(xì)胞永生化,但是對于有些細(xì)胞,重建端粒酶活性并不足以使細(xì)胞永生化,還需要借助癌基因法。
02癌基因法
一些原癌基因,如Myc, c-Jun, c-Ias, vsrc和Mdm2,通過基因轉(zhuǎn)染可介導(dǎo)目的細(xì)胞永生化。c-Myc是最早被發(fā)現(xiàn)的原癌基因,有許多與瘤化相關(guān)的功能區(qū)域,其轉(zhuǎn)錄表達(dá)的蛋白通過核膜進(jìn)入細(xì)胞核與端粒酶的啟動子結(jié)合位點特異性結(jié)合,誘導(dǎo)端粒酶mRNA快速表達(dá),直接激活端粒酶活性,促進(jìn)細(xì)胞進(jìn)入永生化。
細(xì)胞永生化過程中,抑癌基因如p53, pRb, BRCA1, DPC4等,通過等位基因隱性作用、抑癌基因的顯性負(fù)作用等逐漸失去活性,細(xì)胞老化途徑受阻。實驗證明端粒酶的活性與抑癌基因表達(dá)產(chǎn)物的下調(diào)有相關(guān)關(guān)系,推測抑癌基因的失活協(xié)同端粒酶的激活共同參與細(xì)胞永生化進(jìn)程。
03病毒基因轉(zhuǎn)染
很多病毒感染能夠誘導(dǎo)細(xì)胞永生化,例如EB病毒(epstein-barr virus, EBV)、猿猴病毒40 (simian virus40, SV40)和人乳頭瘤病毒(human papillomavirus, HPV)。這些病毒感染其天然宿主細(xì)胞,能誘導(dǎo)細(xì)胞永生化。
EBV能使B淋巴母細(xì)胞永生化形成淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系,它是通過潛伏蛋白激活細(xì)胞因子與其受體相互作用的途徑使細(xì)胞永生的。EBV永生化B細(xì)胞的一個顯著的特點是端粒酶活性的提高,這可能是導(dǎo)致B細(xì)胞永生的主要原因。目前,EB病毒介導(dǎo)的細(xì)胞永生化應(yīng)用最多的是B淋巴細(xì)胞,其他細(xì)胞中的應(yīng)用很少。
SV40是簡單的真核細(xì)胞病毒,SV40的T抗原片段是常用的目的片段,將其整合入靶細(xì)胞核內(nèi)并表達(dá),可導(dǎo)致細(xì)胞增殖活力的改變并表現(xiàn)出多種與腫瘤相關(guān)的轉(zhuǎn)化顯型。應(yīng)用的方法包括:野生型SV40病毒共培養(yǎng)感染靶細(xì)胞、磷酸鈣法、電穿孔以及逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法等。
HPV已成功將人的包皮細(xì)胞、角化上皮以及乳腺、胰導(dǎo)管和口腔等的上皮細(xì)胞永生化。HPV病毒的早期表達(dá)蛋白E6和E7在細(xì)胞永生化中起決定性作用。E6和E7蛋白能夠改變細(xì)胞的終末分化,誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)入S期,使細(xì)胞繞過正常細(xì)胞的周期檢查點。