名稱:人正常胰腺類器官培養(yǎng)基試劑盒
貨號:WS002-100-KIT/WS002-500-KIT
規(guī)格:100ml/500ml
品牌:WinSera
人正常胰腺類器官培養(yǎng)基是一款促進人正常胰腺類器官體外形成和擴增的培養(yǎng)基。該產(chǎn)品為無菌的液體混合系統(tǒng),含有維持目的細胞生長所必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物以及生長因子等。該培養(yǎng)基的du特配方可以提供一個合適的細胞所需營養(yǎng)環(huán)境,促進人正常胰腺類器官的體外生長和擴增。
一、試劑盒組成:
組分 | 名稱 | 規(guī)格 | 保存 |
A組分 | 人正常胰腺類器官培養(yǎng)基 | 100 ml | 4℃ |
B組分 | 人正常胰腺類器官培養(yǎng)基緩沖液 | 500 ml | 4℃ |
C組分 | 人正常胰腺原代組織xiao化液 | 30 ml | 4℃ |
D組分 | 類器官傳代消化液 | 30 ml | 4℃ |
E組分 | 組織保存液 | 100 ml | 4℃ |
F組分 | 類器官凍存液 | 20 ml | 4℃ |
、1、原代
(1)將組織放入含有特殊組織保存液E的組織取樣瓶中,快速轉運至潔凈實驗室進行組織處理和干細胞分離,拍照并登記信息。
(2)準備若干培養(yǎng)皿,加入 4℃預冷的人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B備用。
(3)取樣瓶消毒,將組織放入培養(yǎng)皿中,利用人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B清洗三次后,利用眼科jian或手術dao將腫瘤組織jian切成體積約為 1-3 mm3的組織塊。
(4)組織用人正常胰腺原代組織xiao化液C消化,37℃震蕩消化10-20 min,(消化過程中隨時觀察消化情況)。
(5)取少量液體在顯微鏡下觀察,鏡下觀察到較多的單個細胞或 70 um 以下的細胞簇后,加入三倍體積人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B終止消化。
(6)使用100 um孔徑的篩網(wǎng)進行過濾,將濾液收集后,于300 g富集離心5 min后移去上清,添加人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B重新重懸離心。
(7)基質膠計算:第6步后觀察收集到的組織體積,添加25倍組織體積的基質膠(abs9495)重懸鋪板。
(8)24孔細胞培養(yǎng)板為例,每孔點膠25 ul組織基質膠混合物進行鋪板(4℃下操作)。
(9)將鋪好的培養(yǎng)板放入37℃培養(yǎng)箱中10-15 min成膠,添加人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A(恢復室溫)進行培養(yǎng)。
2、類器官傳代培養(yǎng)
(1)移液器吸去培養(yǎng)基,每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液B放置2 min。
(2)移液槍輕柔吹打基質膠,收集在15 ml離心管中,4℃靜置10 min。(每6-8孔為一組)
(3)A:類器官數(shù)量不足或體積較小時: 離心5 min棄去上清,添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管,300 g離心5 min棄去液體進行第4步。
B:類器官數(shù)量較多或體積較大時:離心5 min棄去上清,添加適量類器官傳代消化液D消化2-3 min,添加人正常胰腺類器官緩沖液B終止消化,離心5 min棄去混合液,添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管,300 g離心5 min棄去液體進行第4步。
(4)類器官收集后,添加基質膠重懸,每孔25 ul基質膠鋪在24孔細胞培養(yǎng)板中,放置培養(yǎng)箱中10-15 min添加500 ul人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A。
3、類器官凍存
(1)移液器吸去培養(yǎng)基,每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液B放置2 min。
(2)移液搶輕柔吹打基質膠,收集在15 ml離心管中,4℃靜置10 min。(每6-8孔為一組)
(3)離心5 min棄去上清,添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B再次重懸,300 g離心5 min棄去液體。
(4)添加適量類器官凍存液F,輕柔吹打重懸,以24孔細胞培養(yǎng)板為例:密度為2個孔凍存1管,每管體積4 ml。
(5)做好標記信息,進行程序降溫后,移入液氮長期保存。
4、類器官復蘇
(1)取10 ml人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B于15 ml離心管中。
(2)從液氮罐中取出凍存的類器官細胞,快速置于 37℃水浴鍋中融解。
(3)水浴融解過程中,需輕輕搖動冷凍管,以確保凍存液在 1-2 min內wan全融解。
(4)將溶解后的類器官細胞快速轉移至15 ml 離心管,使用移液管輕輕吹打6-8次,300 g離心5 min,然后除去上清液并收集類器官細胞沉淀。添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入5 ml離心管300 g離心5 min。
(5)基質膠重懸,每孔25 ul基質膠鋪在24孔細胞培養(yǎng)板中,放置培養(yǎng)箱中10-15 min成膠,添加500 ul人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A。
(1)將組織放入含有特殊組織保存液E的組織取樣瓶中,快速轉運至潔凈實驗室進行組織處理和干細胞分離,拍照并登記信息。
(2)準備若干培養(yǎng)皿,加入 4℃預冷的人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B備用。
(3)取樣瓶消毒,將組織放入培養(yǎng)皿中,利用人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B清洗三次后,利用眼科jian或手術dao將腫瘤組織jian切成體積約為 1-3 mm3的組織塊。
(4)組織用人正常胰腺原代組織xiao化液C消化,37℃震蕩消化10-20 min,(消化過程中隨時觀察消化情況)。
(5)取少量液體在顯微鏡下觀察,鏡下觀察到較多的單個細胞或 70 um 以下的細胞簇后,加入三倍體積人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B終止消化。
(6)使用100 um孔徑的篩網(wǎng)進行過濾,將濾液收集后,于300 g富集離心5 min后移去上清,添加人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B重新重懸離心。
(7)基質膠計算:第6步后觀察收集到的組織體積,添加25倍組織體積的基質膠(abs9495)重懸鋪板。
(8)24孔細胞培養(yǎng)板為例,每孔點膠25 ul組織基質膠混合物進行鋪板(4℃下操作)。
(9)將鋪好的培養(yǎng)板放入37℃培養(yǎng)箱中10-15 min成膠,添加人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A(恢復室溫)進行培養(yǎng)。
2、類器官傳代培養(yǎng)
(1)移液器吸去培養(yǎng)基,每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液B放置2 min。
(2)移液槍輕柔吹打基質膠,收集在15 ml離心管中,4℃靜置10 min。(每6-8孔為一組)
(3)A:類器官數(shù)量不足或體積較小時: 離心5 min棄去上清,添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管,300 g離心5 min棄去液體進行第4步。
B:類器官數(shù)量較多或體積較大時:離心5 min棄去上清,添加適量類器官傳代消化液D消化2-3 min,添加人正常胰腺類器官緩沖液B終止消化,離心5 min棄去混合液,添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入1.5 ml離心管,300 g離心5 min棄去液體進行第4步。
(4)類器官收集后,添加基質膠重懸,每孔25 ul基質膠鋪在24孔細胞培養(yǎng)板中,放置培養(yǎng)箱中10-15 min添加500 ul人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A。
3、類器官凍存
(1)移液器吸去培養(yǎng)基,每孔添加1-2 ml 4℃類器官緩沖液B放置2 min。
(2)移液搶輕柔吹打基質膠,收集在15 ml離心管中,4℃靜置10 min。(每6-8孔為一組)
(3)離心5 min棄去上清,添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B再次重懸,300 g離心5 min棄去液體。
(4)添加適量類器官凍存液F,輕柔吹打重懸,以24孔細胞培養(yǎng)板為例:密度為2個孔凍存1管,每管體積4 ml。
(5)做好標記信息,進行程序降溫后,移入液氮長期保存。
4、類器官復蘇
(1)取10 ml人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液B于15 ml離心管中。
(2)從液氮罐中取出凍存的類器官細胞,快速置于 37℃水浴鍋中融解。
(3)水浴融解過程中,需輕輕搖動冷凍管,以確保凍存液在 1-2 min內全部融解。
(4)將溶解后的類器官細胞快速轉移至15 ml 離心管,使用移液管輕輕吹打6-8次,300 g離心5 min,然后除去上清液并收集類器官細胞沉淀。添加適量人正常胰腺類器官緩沖液B重懸移入5 ml離心管300 g離心5 min。
(5)基質膠重懸,每孔25 ul基質膠鋪在24孔細胞培養(yǎng)板中,放置培養(yǎng)箱中10-15 min成膠,添加500 ul人正常胰腺類器官培養(yǎng)基A。
三、儲存/保存方法
組分 | 保存方法 |
人正常胰腺類器官培養(yǎng)基 A | 4°C保存,3個月或-20°C保存,1年 |
人正常胰腺類器官培養(yǎng)緩沖液 B | 4°C保存,3個月或-20°C保存,1年 |
人正常胰腺類器官培養(yǎng)基試劑盒相關產(chǎn)品:
溫馨提示:本產(chǎn)品僅作科研實驗使用,不支持臨床等研究