精品亚洲a∨无码专区毛片-精品亚洲aⅴ无码午夜在线-精品亚洲aⅴ无码午夜在线观看-精品亚洲aⅴ无码一区二区三区-精品亚洲aⅴ无码专区毛片-精品亚洲aⅴ在线

上海尚寶生物科技有限公司
初級會員 | 第4年

400-611-0007

Annexin V PE/7-AAD 凋亡檢測試劑盒使用說明書

時間:2023/11/20閱讀:146
分享:

Annexin V PE/7-AAD 凋亡檢測試劑盒

產品貨號: BA1984

產品規(guī)格: 20T/50T/100T

產品簡介

細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面,這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜內轉移到細胞膜外,使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂,正常主要存在于細胞膜的內面在細胞發(fā)生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS 的特性,對PS有高度的親和性。因此,該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所的,也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的,而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就破壞了。因此,可以采用AnnexinV7-AAD雙染的方法,通過流式檢測細胞早期凋亡。


產品組成:

產品名稱

20T

50T

100T

保存條件

4× (Binding Buffer 4×)

4ml

10ml

20ml

2-8

7-AAD Viability Staining Solution

0.2ml

0.5ml

1.0ml

2-8

rhAnnexin V/PE

0.1ml

0.25ml

0.5ml

2-8

操作步驟(僅供參考):

1. 細胞樣品的準備:

a) 對于貼壁細胞:小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內備用。用不含EDTA的胰酶消化細胞,至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。1000rpm左右離心5min,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞無法離心至離心管底可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清;

b) 對于懸浮細胞:1000rpm左右離心5min,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞無法離心管底,可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50µl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清;

2. 用去離子水按1:3稀釋結合緩沖液(4ml 4×結合緩沖液+12ml去離子水);

3. 1×結合緩沖液重新懸浮細胞,調節(jié)其濃度為1-5×106 /ml;

4. 100µl的細胞懸液于5ml流式管中,加入5µl Annexin V/PE混勻后于室溫避光孵育5分鐘;

5. 加入10µl 20ug/ml7AAD,并加400µl PBS,立刻進行流式檢測。

實驗設計:

1)未轉染細胞

空白管:陰性對照組細胞,不加Annexin V/PE,7AAD,用于調節(jié)電壓。

單染管:陽性對照組細胞,只加Annexin V/PE或只加7AAD,用于調節(jié)補償。

檢測管:處理的細胞,加Annexin V/PE,7AAD。用空白管和單染管調節(jié)好電壓補償后,獲得所需要的流式數(shù)據(jù)。 2)轉染GFP

未轉染空白管:未轉染細胞,不加Annexin V/PE,7AAD,用于調節(jié)電壓。

未轉染單染管:未轉染且有明顯凋亡的細胞,只加Annexin V/PE或只加7AAD,用于調節(jié)補償。

轉染GFP空白管:轉染GFP對照組細胞,不加Annexin V/PE7AAD,用于調節(jié)補償。

檢測管:處理的細胞,加Annexin V/PE7AAD。調節(jié)好電壓補償后,獲得所需要的流式數(shù)據(jù)

注意事項:

1. Annexin V是與磷脂酰絲氨酸(PS)親和,而PS在不同種屬間沒差異。在正常細胞中,PS只分布在細胞膜脂質雙層的內側,而在細胞凋亡早期,PS由脂膜內側翻向外側。

2. 低濃度胰酶消化,輕柔吹打貼壁細胞23次,離心機41000rpm 5min離心,處理得當?shù)脑挘让冈斐蓳p傷可以控制在5%以內,有對照組的情況下對實驗結果不會造成明顯影響。

3. 先加PI不僅染色是否每組都均勻充分很難判斷,而且PI本身對細胞也是有毒性的,對實驗結果影響會比胰酶大,不建議這樣做。

4. Annexin VCa依賴的蛋白,所以不能加入EDTA,防止EDTA螯合了Ca離子從而影響Annexin V,進而影響結果。

5. 用流式檢測凋亡時,7AAD受時間的影響很大,因標記了7AAD后會加大細胞毒性,隨著時間延長會導致7AAD的染色增加,特別是檢測早期凋亡時,如果時間延長除了會導致在流式細胞儀上的細胞分群差距加大外,誤差會明顯加大。一般7AAD加上后立刻上機,然后在一個小時內檢測完成。兩種方法都可以,但是按照我們操作步驟造成的誤差會更小。

保存條件:2-8℃避光,勿冷凍。6個月有效。




會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
撥打電話
在線留言
主站蜘蛛池模板: AV成人精品日韩一区| 人妻无码一区二区三区| 日本高清一二三不卡区| 国产另类日韩欧美| 亚洲 欧美 中文 在线 视频| 中文字幕熟女人妻伦伦在线| 国产内射爽爽大片| 色欲AV亚洲AV无码精品| 四虎永久在线精品免费观看视频 | 久久精品无遮挡一级毛片| 中文字幕偷拍日韩欧美| 欧美国产日韩另类综合一| 精品无码国产一区二区日本| 亚洲专区在线| 亚洲精品免费在线| 国产精品乱码在线观看av免| 色偷偷AV亚洲男人的天堂| 特级A欧美做爰AAAAA片| 成人国内免费精品视频在线观看| 欧美日韩激情无码专区| 精品乱子伦一区二区三区| 成人精品a视频一区| 看黄子片wwwabc300| 欧洲mv亚洲mv永久入口免费| 欧美一区二区在线播放| 国产在线观看第五页| 亚洲国产熟妇无码一区二区三区H 亚洲国产丝袜久久精品区 | 国产精品1区| 秋霞免费理论片在线观看| 国产精品高潮呻吟AV久久| av无码不卡在线日韩av| 久久久人妻一区精| 国产在线自乱拍播放| 久久久久亚洲av成人网人人软| 精品少妇人妻av无码久久| 亚洲精品一区二区三区新线路| 免费永久在线观看黄网站| 国产精品丰满人妻AV麻豆| 欧日韩国产无码专区| 国产色情久久久久久久久| 91在线视频一区|