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上海尚寶生物科技有限公司
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RIPA裂解液(強(qiáng))(蛋白類)

參  考  價(jià):130 - 480
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    上海市

規(guī)格

50ml 130元 9999瓶 可售

100ml 190元 9999瓶 可售

500ml 480元 9999瓶 可售

更新時(shí)間:2023-06-29 12:58:23瀏覽次數(shù):1462次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100ml
貨號(hào) T0013B 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
RIPA裂解液(強(qiáng))(蛋白類)多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白,如 Triton、SDS、NP-40等。RIPA 裂解液(強(qiáng))(RIPA Lysis Buffer)是采用一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解并獲得總蛋白的裂解液,其裂解強(qiáng)度大于NP-40裂解液、RIPA 裂解液(中)。所獲得的蛋白質(zhì)可用于 Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)等。

RIPA裂解液(強(qiáng))(蛋白類)

產(chǎn)品貨號(hào):T0013B

產(chǎn)品包裝:50ml/100ml/500ml

RIPA裂解液(強(qiáng))(蛋白類)產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

  多種成分均可以從細(xì)胞中提取總蛋白,如 Triton、SDS、NP-40 等。RIPA 裂解液(強(qiáng))(RIPA Lysis Buffer) 是采用一種經(jīng)典的細(xì)胞組織快速裂解并獲得總蛋白的裂解液,其裂解強(qiáng)度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(中)。 所獲得的蛋白質(zhì)可用于 Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)等。

  Medium RIPA Lysis Buffer 主要由 Tris 、NP-40、sodium deoxycholate 等組成,并含有多種蛋白酶抑制劑成分, 可以有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。

產(chǎn)品組成:

試劑名稱   50ml   100ml  500ml  保存條件 
 Weak RIPA Lysis Buffer50ml100ml500ml-20℃
PMSF(100mM)0.75ml1.5ml7.5ml-20℃


操作步驟(僅供參考):

(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞

1. 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室溫溶解混勻,加入 PMSF,使 PMSF 終濃度為 1mM。

2. 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液,用 PBS、NS 或無(wú)血清培養(yǎng)液清洗 1 次,低速離心,棄上清, 留取沉淀。

3. 按照 6 孔板每孔加入 150~250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例,加入 RIPA Lysis Buffer。移液器輕輕吹打, 使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或 4℃裂解,通常裂解液作用于細(xì)胞 1~3s 內(nèi),細(xì)胞就會(huì)被裂解。通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200~ 250μl。

4. 10000~12000g,4℃離心 5~10min(如無(wú)低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。

5. 后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞

1. 取 Weak RIPA Lysis Buffer 置室溫溶解混勻后,加入 PMSF,使 PMSF 終濃度為 1mM。

2. 低速離心懸浮細(xì)胞,棄上清,收集沉淀。

3. 用手指輕彈細(xì)胞,使其松散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150~250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例,加入 Weak RIPA Lysis Buffer 。通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大 裂解液的用量到 200~250μl。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。

4. 10000~12000g,4℃離心 5~10min(如無(wú)低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。

5. 進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

(三)組織樣本

1. 取 Enhanced Lysis Buffer 置于室溫溶解混勻后,加入 PMSF,使 PMSF 終濃度為 1mM。

2. 把組織剪切成細(xì)小的碎片,越小越好。 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織,迅速用液氮研磨, 研磨過(guò)程盡量控制在 1~2min 之內(nèi),以減少蛋白的降解。

3. 按照每 20mg 組織加入 150~250μl 裂解液的比例,加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解 15~30min。

4. 步驟 3、4 亦可以采用如下過(guò)程:按照每 20mg 組織加入 150~250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,直至充分裂解,該過(guò)程盡量控制在 1~2min 之內(nèi),以 減少蛋白的降解。

5. 10000~12000g,4℃離心 5~10min(如無(wú)低溫離心機(jī),室溫下離心亦可),取上清。

6. 進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事項(xiàng):

1. 去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后,如果血清中的蛋白沒(méi)有干擾,可以不用清洗。

2. 如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。

3. 如果細(xì)胞量較多,必需分裝成 50~100 萬(wàn)細(xì)胞/離心管,然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分,而少量的 細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸,相對(duì)比較容易裂解充分。

4. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過(guò)強(qiáng)烈 Vortex 使樣品裂解充分。然 后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

5. 溶解 RIPA Lysis Buffer 時(shí),應(yīng)盡量縮短溶解時(shí)間,避免有效成分失效。

6. 裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復(fù)合物。在 不檢測(cè)和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如果需要檢測(cè)和 基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 如果檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子,例如 NF-KB、p53 等時(shí),通常不必進(jìn)行超聲處理,就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因 子。

7. 細(xì)胞裂解的操作步驟,應(yīng)置于冰上或 4℃進(jìn)行。

有效期: 12 個(gè)月有效。

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