雙縮脲總蛋白試劑

產品貨號：T15260

產品規格：100ml/500ml

產品簡介：

雙縮脲是一種用于分析蛋白質的方法，雙縮脲反應的原理是在呈藍色的堿性硫酸銅溶液存在的情況下，銅離子與肽鍵形成有色螯合的銅復合物，呈紫色。所產生的顏色密度與參與反應肽鍵數成比例。可通過比色法分析濃度，在紫外可見光譜中的波長為540nm。雙縮脲法測定蛋白濃度兼容性亦很好，不受大部分樣本中其他成分的影響，但易受銅離子螯合劑影響，另外，對于血清總蛋白的雙縮脲分析，膽紅素、脂類、血紅蛋白、葡聚糖具有一定干擾作用。

尚寶生物 雙縮脲總蛋白試劑由硫酸銅、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉等組成，在10～160mg/ml濃度范圍內有較好的線性關系，是對蛋白質的精確定量分析試劑。

產品組成：

自備材料：

• 分光光度計或酶標儀
• 96孔板或離心管

雙縮脲總蛋白試劑操作步驟(僅供參考)：

• 取1ml蛋白標準配制液或稀釋液加入到蛋白標準(BSA)中，充分溶 解后配制成160mg/ml的蛋白標準溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標準溶液應-20℃保存。

特別提示：待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中。例如待測蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白標準溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液。

• 將標準品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的標準品孔，加稀釋液補足至20μl。
• 加適當體積待測蛋白樣本到96孔板的樣品孔中。如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液不同，應在待測蛋白樣本孔中加入20μl稀釋液；如果標準品稀釋液與溶解待測蛋白樣本的溶液相同，無需在待測蛋白樣本孔中加入 20μl 稀釋液。
• 各孔加入200μl 雙縮脲總蛋白試劑, 室溫放置10～15min。
• 測定540nm波長處的吸光值，如無540nm，520～562nm之間的波長也可。
• 根據標準曲線計算出樣品的蛋白濃度。

注意事項：

• 待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標準也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測蛋白與蛋白標準中所含非蛋白成分不一致，有可能導致測定不準確。
• 待測蛋白和蛋白標準加入雙縮脲試劑后，如果發現檢測效果不佳，可以室溫放置1h或60℃放置15min，顏色會隨著時間的延長不斷加深。顯色反應也會隨溫度升高而加快。如果濃度較低，可以適當延長孵育時間或在較高溫度下孵育。

• 測定標準曲線時發現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯發化，可能的原因是樣品中含有銅離子螯合劑。
• 建議每次測定時都做標準曲線。因為顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標準曲線。
• 如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應考慮根據比色皿的最小檢測體積。應按比例適當加大雙縮脲試劑的用量使總體積不小于最小檢測體積，樣品和標準品的用量亦相應按比例放大。使用分光光度計測定蛋白濃度時，每個試劑盒可以測定的樣品數量可能會顯著減少。
• 檢測中出現所有孔都呈暗紫色，可能原因是樣品含有還原劑，應適當透析或稀釋樣品。
• 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：12個月有效。