供貨周期 |
現貨 |
規格 |
100ml |
貨號 |
T15196 |
應用領域 |
化工,生物產業 |
主要用途 |
僅供科研使用 |
Triton X-100細胞裂解液 蛋白類是一種經典的快速裂解細胞組織并獲得蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質可以用于 PAGE電泳,Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。
Triton X-100細胞裂解液
產品貨號:T15196
產品規格:100ml
產品簡介:
Triton X-100細胞裂解液是一種經典的快速裂解細胞組織并獲得蛋白的裂解液。所獲得的蛋白質可以用于 PAGE電泳,Western,免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等。Triton X-100、NaCl、Tris-HCl 等組成,并含有多種蛋白酶抑制劑成分,可以有效抑制蛋白的降解,并維持原有的蛋白間相互作用。作用原理是利用去污劑Triton X-100 破壞脂質雙分子層,溶解胞質和細胞膜,破壞分子間微弱結合鍵的大部分蛋白質抗原。其濃度在0.1%~1%時即可滿足幾乎所有溶解的需求,且可補充等離子濃度的鹽及使pH 接近中性。不宜用 Bradford 法測定由Triton X-100 Lysis Buffer獲得樣本的蛋白濃度。
產品組成:
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
Triton X-100 Lysis Buffer | 10ml | -20℃ |
PMSF(100mM) | 1.5ml | -20℃ |
操作步驟(僅供參考):
(一)貼壁培養細胞
- 取Triton X-100 Lysis Buffer 室溫溶解混勻,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。
- 去培養液,用PBS、NS或無血清培養液清洗1次,低速離心,棄上清,留取沉淀。
- 按照6孔板每孔加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例加入Triton X-100 Lysis Buffer。移液器輕輕吹打,使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上或4℃裂解,通常裂解液作用于細胞1~3s內,細胞就會被裂解。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200~250μl。
- 10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。
- 進行后續的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(二)懸浮培養細胞
- 取Triton X-100 Lysis Buffer室溫溶解混勻,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。
- 低速離心懸浮細胞,棄上清,收集沉淀。
- 用手指輕彈細胞,使其松散。按照6孔板每孔細胞加入150~250μl含有PMSF的裂解液的比例,加入尚寶生物Triton X-100 Lysis Buffer 。通常6孔板每孔細胞加入150μl裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200~250μl。
- 再用手指輕彈以充分裂解細胞,充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。
- 10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。
- 進行后續的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
(三)組織樣本
- 取Triton X-100 Lysis Buffer 室溫溶解混勻后,加入PMSF,使PMSF終濃度為1mM。
- 把組織剪切成細小的碎片,越小越好。
- 取在液氮或超低溫冰箱中冷凍30min以上的組織,迅速用液氮研磨,研磨過程盡量控制在1~2min之內,以減少蛋白的降解。
- 按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解15~30min。
- 步驟3、4亦可以采用如下過程:按照每20mg組織加入150~250μl裂解液的比例加入含有PMSF的Triton X-100 Lysis Buffer。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿,直至充分裂解,該過程盡量控制在1~2min之內,以減少蛋白的降解。
- 10000~12000g,4℃離心5~10min(如無低溫離心機,室溫下離心亦可),取上清。
- 進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注意事項:
- 去除貼壁細胞的培養液后,如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不用清洗。
- 如果裂解不充分可以適當增加裂解液的用量,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。
- 如果細胞量較多,必需分裝成50~100萬細胞/離心管,然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分,而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸,相對比較容易裂解充分。
- 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈Vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
- 溶解Triton X-100 Lysis Buffer時,應盡量縮短溶解時間,避免有效成分失效。
- 裂解產物中經常會出現一小團透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。在不檢測和基因組DNA結合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續實驗。如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續實驗。如果檢測一些常見的轉錄因子,例如NF-KB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉錄因子。
- 細胞裂解的操作步驟,應置于冰上或4℃進行。
有效期:12個月有效。