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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 20T |
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貨號 | 15138 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 僅供科研使用 |
蛋白快速銀染試劑盒
產品貨號:15138
產品規格:20T
產品簡介:蛋白快速銀染試劑盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一種快速的可用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白銀染染色的試劑盒,該試劑盒含有增敏步驟,可明顯降低背景。其優點還在于:1、操作簡單、快速;2、可用于2D凝膠的銀染,并可進行后續的質樸檢測;3、目的條帶清晰;4、不含甲醇。Protein Fast Silver Stain Kit與Protein SilverStain Kit相比,前者操作速度更快,但檢測靈敏度可能低于后者,尤其是在檢測小分子量蛋白質的時候。本試劑盒僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途。
產品組成:
試劑名稱 20T 保存條件
試劑(A): Silver Stain Sensitizer(500×) 2×1ml 室溫
試劑(B): Silver Stain(100×) 10ml 室溫,避光
試劑(C): Silver Stain Developer(5×) 2×100ml 室溫,避光
試劑(D): Silver Stain Stop Buffer(10×) 100ml 室溫
自備材料:
1. 水平搖床或側擺搖床
2. 去離子水(超純)
3. 乙醇、冰乙酸
操作步驟 (僅供參考) :
1. 準備工作:以下操作以 8.5×5.5cm、厚度為 1.0mm 的凝膠為例,以凝膠全部浸沒到溶液為準,一般用量是25ml,對于凝膠體積較大的,各溶液的使用量需按凝膠體積比例放大。整個銀染過程應在搖床上進行,搖床轉速控制在 60~70rpm。提前配制固定液,即按無水乙醇:冰乙酸:去離子水=5:1:4 的比例配制。提前配制洗滌液,即按無水乙醇:去離子水=1:4 的比例配制。
2. 水洗:電泳結束后,取凝膠放入去離子水中清洗 2 次,每次 5min。
3. 固定:取凝膠放入 50~100ml 固定液中,在搖床上室溫搖動 15~20min,重復固定步驟 1 次。
4. 洗脫:取凝膠放入洗滌液中清洗 2 次,每次 5min。
5. 水洗:去離子水清洗凝膠 2 次,每次 5min。
6. 增敏:配制銀染增敏工作液,即取 Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml 加入到 50ml 去離子水中,混勻,即 1×Silver Stain Sensitizer,一般應 2h 內用完。室溫下用 1×Silver Stain Sensitizer 孵育凝膠 2min,立即用去離子水清洗凝膠 2 次,每次 1min。
7. 銀染:配制銀染工作液,即取 Silver Stain(100×)0.5ml 加入到 50ml 去離子水中,混勻,即得 1×Silver Stain,一般應 2h 內用完。取凝膠入 1×Silver Stain,在搖床上室溫搖動 10~20min。
8. 水洗:棄液,在搖床上用去離子水清洗凝膠 2 次,每次 30s,搖動速度在 60~70rpm。總的水洗時間應控制在 1.5min 內。
9. 顯影:配制銀染顯影工作液,即取 Silver Stain Developer(5×)10ml 加入到 40ml 去離子水中,混勻,即 1×Silver Stain Developer,一般應 30min 內用完。清洗凝膠后,立即置于 1×Silver Stain Developer 中,室溫孵育 2~10min,直至蛋白條帶清晰可見。一般顯色 30s 后就會出現棕色沉淀,繼續顯影 2~3min,亦可延長至5min 以上,如果顯影效果不佳,可重新更換 1×Silver Stain Developer 繼續顯影。
10. 迅速用去離子水清洗凝膠以避免顯影過度,背景染色。立即加入銀染終止液,搖床上搖動 10min,以終止顯色反應。(配制銀染終止液,即取 Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml 加入到 90ml 去離子水中,混勻,即 1×Silver Stain Stop Buffer,一般應 24h 內用完。)
11. 保存:棄終止液,加入去離子水 50ml,搖床上搖動 2~5min,棄液。短期保存于新鮮去離子水,長期保存可以制備干膠。
注意事項:
背景過深:①顯色時間過長;②洗滌不充分;③凝膠中殘留物質未去除干凈;④去離子水的純度過低。
2. 蛋白條帶較淺:①蛋白的半胱氨酸含量過低;②銀染后水洗時間過長;③蛋白量較低;④固定后的洗滌時間不夠,導致乙酸殘留。
3. 凝膠上出現雜質或非蛋白的印跡:①凝膠沒有被充分浸沒,應加入足量溶液;②容器沒有清洗干凈;③凝膠接觸金屬物質;④指紋或其他壓跡。
4. 本染色液呈酸性,有輕微腐蝕性,使用時請作必要防護。5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。有效期:
6 個月有效。
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