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羧芐青霉素溶液(Carbenicillin,50mg/ml)
細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)
產品貨號:R23340
產品規格:100T
產品簡介:
自噬(autophagy)是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質或細胞器,最終將吞食物在溶酶體內降解的過程,自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結構,內含細胞質、長壽蛋白質和異常蛋白聚集物,損傷或多余細胞器如線粒體、粗面內質網和微體、病毒和細菌等。自噬是一種進化上保守的降解過程,可靶向長壽命蛋白、細胞器及其他細胞質組分并通過溶酶體途徑進行降解。自噬通路的激活對多種細胞功能都是必需的,包括饑餓狀態下的存活、細胞內組分清除、發育及免疫等過程。
單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一種熒光色素,是嗜酸性染色劑,通常被用于檢測自噬體形成的特異性標記染色劑,其檢測激發濾光片波長355nm,阻斷濾光片波長512nm。尚寶細胞自噬染色檢測試劑盒(MDC法)適用于培養細胞的自噬染色,又稱為MDC染色液,可與EB合用雙染。
產品組成:
產品名稱 | 100T | 保存條件 |
試劑(A): MDC Stain(500×) | 30μL | -20℃,避光 |
試劑(B): Stain buffer | 50ml | 4℃ |
試劑(C): Wash buffer | 250ml | 4℃ |
自備材料:
1. 低速離心機
2. 1.5ml離心管
3. 載玻片、蓋玻片
4. 熒光顯微鏡
操作步驟(僅供參考):
(一)玻片法
1. 收集細胞,用300~500μ l的Wash buffer清洗細胞1次,800~1000g離心5min,棄上清。
2. 加入適量的Stain buffer重懸細胞,計數并調節細胞濃度至10 6 /ml。
3. 取5μ l MDC Stain(500×)加至245μ l Stain buffer,混勻,即為MDC Stain(10×)。
4. 取90μ l細胞懸液至新的1.5ml離心管中,加入10μ l的MDC Stain(10×),輕輕混勻。
5. 37℃或室溫避光染色15~45min。
6. 800~1000g離心5min,棄上清,收集細胞,用300~500μ l的Wash buffer清洗細胞2次,800~1000g離心5min,棄上清。
7. 加入100μ l的Wash buffer重懸細胞,滴加于載玻片上并加蓋玻片。
8. 熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長355nm,阻斷濾光片波長512nm),計數并拍照。
(二)96孔板法
1. 配制MDC染色工作液:按MDC Stain(500×):Stain buffer=1:499的比例混合,即為MDC染色工作液。如不能及時用完,應-20℃避光保存。
2. 輕輕吸除96孔板中的培養液,加入100μ l MDC染色工作液至各孔,37℃ 5%CO2避光孵育15~60min。
3. 各孔加入100μ l Wash buffer清洗2~3次。
4. 熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長355nm,阻斷濾光片波長512nm),計數并拍照。
(三)MDC與EB雙染法
1. 收集細胞,用300~500μ l的Wash buffer清洗細胞1次,800~1000g離心5min,棄上清。
2. 加入適量的Stain buffer重懸細胞,計數并調節細胞濃度至 10 6 /ml。
3. 取5μ l MDC Stain(500×)加至245μ l Stain buffer,混勻,即為MDC Stain(10×)。
4. 取90μ l細胞懸液至新的1.5ml離心管中,加入10μ l的MDC Stain(10×)和0.2uM EB染色液,輕輕混勻。
5. 滴加于在玻片上,室溫避光染色15~30min,加蓋玻片。
6. 熒光顯微鏡下觀察(激發濾光片波長512nm),計數并拍照。
染色結果:
正常細胞 細胞被均勻染成黃綠色熒光
凋亡細胞 染色質濃縮,細胞核碎裂成點狀,被染成大小不一,致密濃染的綠色顆粒。
注意事項:
1. MDC Stain和EB對人體有一定害處,請小心操作。
2. AO常與EB染色合用,可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。
3. 操作過程中應注意減少試劑暴露于強光下的時間。
有效期:12個月有效。
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