目錄:優(yōu)利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>生化試劑盒>> 抗壞血酸氧化酶(AAO)活性測定試劑盒
參考價 | ¥520-¥1000 |
參考價:¥520 ~ ¥1000
100管/96樣 50管/48樣
CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現(xiàn)貨 規(guī)格:100管/96樣、50管/48樣 貨號:YLK-SH136 應用領域:化工,生物產(chǎn)業(yè) 主要用途:科研
>100管/96樣 | 1000元 | 117盒可售 |
50管/48樣 | 520元 | 98盒可售 |
更新時間:2024-06-29 08:22:21瀏覽次數(shù):787評價
聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!
CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
---|---|---|---|
分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣、50管/48樣 |
貨號 | YLK-SH136 | 應用領域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 測定方法: | 微量法、可見分光光度法 |
抗壞血酸氧化酶(AAO)活性測定試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
AAO是定位于植物細胞壁的糖蛋白,屬“藍銅氧化酶"家族。細胞壁內的抗壞血酸和AAO與細胞壁的代謝和生長有著密切的聯(lián)系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通過質膜上的細胞色素b還原,該過程中電子的跨膜運輸能夠促進細胞生長。
測定原理:
AAO可直接氧化AsA,通過測定AsA的氧化量,可計算得AAO活力。
實驗中所需儀器及設備:
低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、可調式移液器、研缽、冰、蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體20mL×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入2mL蒸餾水充分溶解。
粗酶液提取:
按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。16000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
AAO測定操作:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,調節(jié)波長到265 nm。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預熱30 min。
3. 依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、170μL預熱的試劑二和10μL試劑三,迅速混勻后在265nm測定10s和130s光吸收A1和A2,△A =A1-A2。
AAO活性計算公式:
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
AAO活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d)×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T
= 92.4×△A÷Cpr
(2). 按樣本質量計算
AAO活性單位定義:25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。
AAO(nmol/min/g 鮮重) = △A÷(ε×d)×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 92.4×△A÷W
ε:AsA在265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol/cm;d:比色皿光徑(cm),1 cm; V反總:反應體系總體積(L),200μL=2×10-4 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒;W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上清液體積(mL),20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;
T:催化反應時間(min),2min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
AAO活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d)×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T
=184.8×△A÷Cpr
(2). 按樣本質量計算
AAO活性單位定義:25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。
AAO(nmol/min/g 鮮重) = △A÷(ε×d)×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 184.8×△A÷W
ε:AsA在265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol/cm;d:96孔板光徑(cm),0.5 cm; V反總:反應體系總體積(L),200μL=2×10-4 L;106:1mol=1×106μmol;Cpr:上清液蛋白質濃度(mg/mL),需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒;W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上清液體積(mL),20μL=0.02 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;
T:催化反應時間(min),2min。
注意事項:
配制好的試劑放在4℃保存,三天內使用完。
抗壞血酸氧化酶(AAO)活性測定試劑盒僅供科研!