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參考價 | ¥150-¥290 |
參考價:¥150 ~ ¥290
100管/96樣 50管/48樣
CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現貨 規格:100管/96樣、50管/48樣 貨號:YLK-SH135 應用領域:化工,生物產業 主要用途:科研
>100管/96樣 | 290元 | 136盒可售 |
50管/48樣 | 150元 | 98盒可售 |
更新時間:2024-06-29 08:24:40瀏覽次數:830評價
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CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
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分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100管/96樣、50管/48樣 |
貨號 | YLK-SH135 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 測定方法: | 微量法、可見分光光度法 |
還原型谷胱/甘肽(GSH)試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
GSH是細胞內最主要的抗氧化巰基物質,在抗氧化、蛋白質巰基保護和氨基酸跨膜運輸等中具有重要作用。還原型與氧化型比值(GSH/GSSG)是細胞氧化還原狀態的主要動態指標。因此,測定細胞內GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能夠很好地反映細胞所處的氧化還原狀態。
測定原理:
DTNB與GSH反應生成復合物,在412nm處有特征吸收峰;其吸光度與GSH含量成正比。
自備儀器和用品:
低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
粗酶液提?。?/span>
1. 組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體:直接測定。
GSH測定操作:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調節波長到412 nm,蒸餾水調零。
2. 試劑二置于25℃(一般物種)或者37℃(哺乳動物)水浴中保溫30min。
3. 空白管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL蒸餾水,140μL試劑二,40μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A1。
4. 測定管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL上清液,140μL試劑二,40μL試劑三,混勻靜置2min后測定412 nm吸光度A2。
注意:空白管只需要測定一次。
GSH含量計算公式:
GSH標準曲線公式:y=1.5 x(x為GSH濃度,μ mol /mL;y為吸光值)
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1)按蛋白濃度計算
GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣×Cpr) =0.667×(A2-A1) ÷Cpr
(2)按樣本質量計算
GSH(μ mol/g 鮮重)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=0.667×(A2-A1) ÷W
(3)按細胞數量計算
GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數量)=0.667×(A2-A1) ÷細胞數量
(4)按液體體積計算
GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷1.5×V樣÷V樣 =0.667×(A2-A1)
V反總:反應總體積,0.2mL;V樣總:上清液總體積,1 mL;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量
b.使用96孔板測定的計算公式如下
GSH標準曲線公式:y=0.75x(x為GSH濃度,μ mol /mL;y為吸光值)
(1)按蛋白濃度計算
GSH(μ mol/ mg prot)=(A2-A1) ÷0.75×V樣÷V樣÷Cpr =1.334×(A2-A1) ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
GSH(μ mol/g 鮮重)=(A2-A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×W)=1.334×(A2-A1) ÷W
(3)按細胞數量計算
GSH(μ mol /104 cell)=(A2-A1) ÷0.75×V樣÷(V樣÷V樣總×細胞數量)=1.334×(A2-A1) ÷細胞數量
(4)按液體體積計算
GSH(μ mol/ mL)=(A2-A1) ÷0.75×V反總÷V樣 =1.334×(A2-A1)
V樣總:上清液總體積,1mL;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL=0.02 mL;Cpr:上清液蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g。
注意事項:
1. 試劑一中含有蛋白質沉淀劑,因此上清液不能用于蛋白濃度測定。
2. Z低檢出限為0.011mmol/L。
還原型谷胱/甘肽(GSH)試劑盒僅供科研!