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參考價 | ¥850-¥1500 |
參考價:¥850 ~ ¥1500
100管/96樣 50管/48樣
CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現貨 規格:100管/96樣、50管/48樣 貨號:YLK-SH134 應用領域:化工,生物產業 主要用途:科研
>100管/96樣 | 1500元 | 118盒 可售 |
50管/48樣 | 850元 | 78盒 可售 |
更新時間:2024-06-29 08:26:11瀏覽次數:892評價
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CAS | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
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分子量 | 詳見說明書 | 分子式 | 詳見說明書 |
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100管/96樣、50管/48樣 |
貨號 | YLK-SH134 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 測定方法: | 微量法、紫外分光光度法 |
谷胱/甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
GSH-Px是谷胱/甘肽氧化還原循環中催化還原型谷胱/甘肽(GSH)氧化的主要酶之一。GSH-Px不僅能夠特異地催化還原型谷胱/甘肽與ROS反應,生成氧化型谷胱/甘肽GSSG,從而保護生物膜免受ROS的損害,維持細胞的正常功能;而且具有保護肝臟、提高機體免疫力、拮抗有害金屬離子對機體的傷害和增加機體抗輻射等能力。
測定原理:
GSH-Px催化有機過氧化物氧化GSH,產生GSSG;谷胱/甘肽還原酶(GR)催化NADPH還原GSSG,再生GSH,同時NADPH氧化生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,而NADP+沒有;通過測定340 nm光吸收減少速率來計算GSH-Px活性。
自備儀器和用品:
低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、酶標儀、96孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體120mL×1瓶,室溫保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體10μL×1支,-20℃保存。
試劑四:液體200μL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1. 組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體:直接測定。
GSH-Px測定操作:
1. 酶標儀預熱30 min,調節波長到340 nm。
2. 混合試劑在25℃或者37℃(哺乳動物)水浴中預熱30min。
3. 混合試劑配制:臨用前,在試劑二中加入試劑一20 mL,充分震蕩溶解后加入全部試劑三,混勻。(當天用完)
4. 試劑四的稀釋:吸取21.5μL試劑四,加入5mL蒸餾水充分混勻,臨用前配制,配制好的試劑當天使用。
5. 測定管:依次在96孔板中加入20μL上清液、160μL預熱的混合試劑、20μL稀釋后的試劑四,迅速混勻后于340nm處測定第30 s和第210s的吸光值,分別記為A1和A2。△A測定管= A1﹣A2。
GSH-Px活性計算:
使用96孔板測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
GSH-Px活力單位定義:一定溫度中,每mg蛋白每分鐘催化1nmol NADPH氧化為1個酶活單位。
GSH-Px (nmol/min/mg prot)=[△A÷ε÷d×V反總×109]÷(Cpr×V樣)÷T
=1072×△A÷Cpr
(2). 按樣本質量計算
GSH-Px活力單位定義:一定溫度中,每g樣本每分鐘催化1nmol NADPH氧化為1個酶活單位。
GSH-Px (nmol/min/g 鮮重)=[△A÷ε÷d×V反總×109]÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1072×△A÷W
(3)按細胞數量計算
活性單位定義:一定溫度中,每104個細胞每分鐘催化1nmol NADPH氧化為1個酶活單位。
GSH-Px (nmol/min/104 cell)= [△A÷ε÷d×V反總×109]÷(細胞數量×V樣÷V樣總)÷T
=1072×△A÷細胞數量
(4)按液體體積計算
活性單位定義:一定溫度中,每毫升液體每分鐘催化1nmol NADPH氧化為1個酶活單位。
GSH-Px (nmol/min/mL)=[△A÷ε÷d×V反總×109]÷V樣÷T
=1072×△A
ε:NADPH摩爾消光系數6.22×103L/mol/cm;d:96孔板光徑,0.5 cm;V反總:反應體系總體積,200μL=2×10-4 L;106:1 mol=1×106μmol; Cpr:上清液蛋白濃度(mg/mL);W :樣品質量;V樣:加入反應體系中上清液體積,20μL =2×10-2 mL;V樣總:提取液體積,1 mL;T:反應時間,3 min。
注意事項:
(1)樣品處理等過程均需要在冰上進行,且須在當日測定酶活力;
(2)混合試劑和底物液須臨用前配制,配完后置于冰上,當天使用完;
(3)測定過程操作須迅速;
(4)細胞中GSH-Px活性測定時,細胞數目須在300萬-500萬之間,細胞中GSH-Px的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理,不能用細胞裂解液處理細胞。
谷胱/甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒僅供科研!