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目錄:優利科(上海)生命科學有限公司>>科研試劑盒>>生化試劑盒>> 乙酰膽/堿酯酶(AchE)活性測定試劑盒

乙酰膽/堿酯酶(AchE)活性測定試劑盒
  • 乙酰膽/堿酯酶(AchE)活性測定試劑盒
參考價200-380
具體成交價以合同協議為準

參考價:¥200 ~ ¥380

具體成交價以合同協議為準
  • YLKBIO 品牌
  • 型號
  • 生產商 廠商性質
  • 下載 產品資料
  • 上海市 所在地
規格

100管/96樣 50管/48樣

屬性

CAS:詳見說明書 純度:詳見說明書 分子量:詳見說明書 分子式:詳見說明書 供貨周期:現貨 規格:100管/96樣、50管/48樣 貨號:YLK-SH133 應用領域:化工,生物產業 主要用途:科研

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規格
100管/96樣380元312盒可售
50管/48樣200元185盒可售

更新時間:2024-06-29 08:28:05瀏覽次數:759評價

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CAS 詳見說明書 純度 詳見說明書
分子量 詳見說明書 分子式 詳見說明書
供貨周期 現貨 規格 100管/96樣、50管/48樣
貨號 YLK-SH133 應用領域 化工,生物產業
主要用途 科研 測定方法: 微量法、可見分光光度法
乙酰膽/堿酯酶(AchE)活性測定試劑盒測定意義:
AchE屬于絲/氨酸水解酶,廣泛存在于各種動物組織和血清中。AchE催化乙酰膽/堿(Ach)水解,在神經傳導調節中起重要作用。

乙酰膽/堿酯酶(AchE)活性測定試劑盒說明書

                                            微量法100T/96S


   正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

AchE屬于絲/氨酸水解酶,廣泛存在于各種動物組織和血清中。AchE催化乙酰膽/堿(Ach)水解,在神經傳導調節中起重要作用。

 

測定原理:

AchE催化Ach水解生成膽/堿,膽/堿與二硫對硝基苯甲酸(DTNB)作用生成5-巰基-硝基苯甲酸(TNB);TNB412nm處有吸收峰,通過測定412 nm吸光度增加速率,計算AchE活性。

自備儀器和用品:

可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、低溫離心機、水浴鍋、可調式移液槍和蒸餾水。

 

試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4保存。

試劑二:液體×1瓶,4保存。

試劑三:粉劑×1支,4保存。臨用前加入1.3 mL試劑二,充分震蕩溶解。

試劑四:粉劑×1支,4保存。臨用前加入1.3 mL試劑二,充分震蕩溶解。

 

粗酶液提?。?/span>

1.        組織:按照組織質量(g:試劑一體(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進行冰浴勻漿,8000g 4℃離心10min,取上清液待測。

2.        細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~10001的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g4,離心10min,取上清置于冰上待測。

3.        血清等液體:直接測定。

 

測定操作:

1.        分光光度計/酶標儀預熱30 min,調節波長到412 nm,蒸餾水調零。

2. 試劑二置于37水浴中預熱30min

3. 微量石英比色皿/96板,依次加入20μL上清液、160 μL試劑二、10μL試劑三和10μL試劑四,迅速混勻,于412nm處測定3min內吸光值變化,第10s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2。A測定管=A2-A1。

 

AchE活性計算:

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1.        組織AchE活性

1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

 

AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (A÷ε÷d×V反總×109Cpr ×V樣)÷T

= 245×A÷Cpr

2)按照樣本質量計算

活性單位定義:每克組織每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/g 鮮重)= (A÷ε÷d×V反總×109W ×V÷V樣總÷T

= 245×A÷W

2.        細菌、細胞AchE活性

活性單位定義:每104個細胞每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位

AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (A÷ε÷d×V反總×109(細胞數量×V÷V樣總÷T

= 245×細胞數量

3.        血清AchE活性

活性單位定義:每毫升血清每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min /mL)= (A÷ε÷d×V反總×109)÷V÷T

=245×A

εTNB摩爾消光系數,13.6×103 L/mol/cm;d:比色皿光徑,1 cm;V反總:反應體系總體積(L),200μL=2×10-4L;V樣總:提取液體積,1 mL;1061mol=1×106μmolCpr:蛋白濃度(mg/mL);V樣:加入上清液體積(mL),0.02 mL;W :樣品質量;T:反應時間(min),3 min。

 

b.使用96孔板測定的計算公式如下

1.        組織AchE活性

1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:每毫克蛋白每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/mg prot)= (A÷ε÷d×V反總×109Cpr ×V樣)÷T

= 490×A÷Cpr

2)按照樣本質量計算

活性單位定義:每克組織每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位

AchE酶活(nmol/min/g 鮮重)= (A÷ε÷d×V反總×109W ×V÷V樣總÷T

= 490×A÷W

2.        細菌、細胞AchE活性

活性單位定義:每104個細胞每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min/104 cell)= (A÷ε÷d×V反總×109(細胞數量×V÷V樣總÷T

= 490×細胞數量

3.        血清AchE活性

活性單位定義:每毫升血清每分鐘催化產生1nmol TNB的酶量為1個酶活單位。

AchE酶活(nmol/min /mL)= (A÷ε÷d×V反總×109)÷V÷T

=490×A

εTNB摩爾消光系數,13.6×103 L/mol/cm;d96孔板光徑,0.5 cm;V反總:反應體系總體積(L),200μL=2×10-4L;V樣總:提取液體積,1 mL1061mol=1×106μmol;Cpr:蛋白濃度(mg/mL);V樣:加入上清液體積(mL),0.02 mLW :樣品質量;T:反應時間(min),3 min

乙酰膽/堿酯酶(AchE)活性測定試劑盒僅供科研!

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